PCR實(shí)驗(yàn)室基本知識(shí)介紹

PCR實(shí)驗(yàn)室基本知識(shí)

1、四個(gè)過程

(在這里面的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、病理、分子生物等專業(yè)的人都基本了解，SICOALB就不多重復(fù)了，簡單說一下)PCR 實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡稱，用于放大特定的 DNA 片 段，可看作生物體外的特殊 DNA 。完成一組 PCR 實(shí)驗(yàn)，通常需經(jīng)過試劑準(zhǔn)備、樣品制備、核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析 4 個(gè)過程。

2、單向

為避免交叉污染，進(jìn)入各個(gè)區(qū)域的工作流程須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，按照清潔-半污染-污染的順序排列，各區(qū)內(nèi)的試劑和耗材不能再進(jìn)入任何“上游”區(qū)域。也就是(試劑準(zhǔn)備區(qū)-樣品制備區(qū)-核酸擴(kuò)增區(qū)-產(chǎn)物分析區(qū))。

常壓PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的要點(diǎn)。 負(fù)壓送風(fēng)系統(tǒng)流向：使用獨(dú)立的全新風(fēng)潔凈空調(diào)機(jī)組，通過潔凈保溫管道加壓至試劑準(zhǔn)備間、樣本間、分析間。PCR實(shí)驗(yàn)室的空氣流向必須嚴(yán)格按照試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進(jìn)行，防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。各個(gè)區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實(shí)驗(yàn)工藝流、物流、與氣流，形成單向流程的保護(hù)屏障，避免實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對(duì)實(shí)驗(yàn)過程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。需要嚴(yán)格的通風(fēng)設(shè)計(jì)，若通風(fēng)設(shè)計(jì)不合理，會(huì)使風(fēng)速流向混亂，甚至危害人們健康。

PCR實(shí)驗(yàn)室可分為2個(gè)大的功能工作區(qū)域：

核酸擴(kuò)增前區(qū)和核酸擴(kuò)增后區(qū)。核算擴(kuò)增前區(qū)包括試劑準(zhǔn)備間和樣本制備間，這個(gè)兩房間各自獨(dú)立，不能出現(xiàn)空氣互通，這兩個(gè)房間相對(duì)外界氣壓呈正壓狀態(tài)。核酸擴(kuò)增后區(qū)包括擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)，使用實(shí)時(shí)熒光PCR儀、HIV病毒載量測(cè)定儀的PCR實(shí)驗(yàn)室，這個(gè)兩區(qū)域可以合并為一個(gè)房間。這個(gè)區(qū)域如果是分開兩個(gè)房間，這兩個(gè)房間也必須是各自獨(dú)立，不能出現(xiàn)空氣互通。核算擴(kuò)增后區(qū)對(duì)外界氣壓呈負(fù)壓狀態(tài)。