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HPLC (HPLC)作為一種、快速的分析分離技術(shù)，在上個世紀(jì)70年代得到迅速發(fā)展，是現(xiàn)代分離檢測的重要手段。層析法的分離原理是：當(dāng)溶解于流動相(mobile phase)的各組分通過固定相(station phase)發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)，其大小、強弱不同，在固定相中的滯留時間也不同，從而先后從固定相中流出。也叫色層法，色譜法。

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HPLC法適用范圍很廣，樣品適用范圍廣，不受分析對象的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，幾乎所有化合物都包括高沸點、極性、離子型及大分子等，都可以用 HPLC分析測定，從而彌補了氣相色譜法的不足?，F(xiàn)有已知有機化合物中20%左右可用的氣相色譜分析方法，而80%需要 HPLC分析。液相色譜由于其分離、分析速度快、檢測靈敏度高、可分析分離高沸點、不氣化、熱不穩(wěn)定等生理活性物質(zhì)等特點，已在藥典中得到了廣泛的應(yīng)用，并已在藥典中廣泛應(yīng)用。HPLC分析方法不受溫度和樣品沸點的限制，因而具有廣泛的應(yīng)用前景。HPLC技術(shù)經(jīng)過30多年的快速發(fā)展，在基礎(chǔ)理論、儀器設(shè)備、色譜柱等方面的研究日趨成熟，目前已成為化學(xué)化工、環(huán)境、藥學(xué)、食品等領(lǐng)域具優(yōu)勢的分離分析方法之一。

移動相中受熱，或流動相不同組分混合將產(chǎn)生氣體，氣泡進入泵內(nèi)造成壓力波動，色譜圖上出現(xiàn)毛刺?？梢栽囉靡韵路椒▉斫鉀Q問題：流動相再脫氣；采用更有效的脫氣方法或兩者配合使用；改系統(tǒng)外混合前進行混合。HPLC使用的流動相必須預(yù)先除氣，否則很容易在系統(tǒng)中漏氣，影響泵的工作。在體系中產(chǎn)生氣泡：流動相本身存在，梯度淋洗混合后會放出氣泡；氣泡的影響：存在于管道中，系統(tǒng)壓力不穩(wěn)定，實驗結(jié)果偏離；存在于單向閥中，容易導(dǎo)致液體回流，流量不準(zhǔn)確，甚至不吸液存在于檢測器中，對檢測器產(chǎn)生影響。因此對液相相對流動相的氣泡和雜質(zhì)要求比較嚴(yán)格。汽泡對柱子的分離效率有影響，檢測器的靈敏度、基線穩(wěn)定性甚至不能檢測。(噪音增加、基線不穩(wěn)定、突然跳動)。

另外，溶解在流動相中的氧也可以與樣品、流體相甚至固定相(如胺)反應(yīng)。溶氣還會引起溶劑 pH值的變化，給分離和分析結(jié)果帶來誤差。溶氧能與某些溶劑(例如，、四氫)形成紫外吸收絡(luò)合物，這種配合物能夠改善背景吸收(尤其是低于260 nm)，并導(dǎo)致探測靈敏度的輕微下降，但更重要的是，會造成基線漂移或形成鬼峰(假峰)。熒光檢測中，在一定條件下，溶解氧也會引起溶解氧，尤其是芳香烴、脂肪醛、酮等。有時，熒光反應(yīng)可降至95%以上。電化學(xué)檢測(尤其是還原電化學(xué)法)對氧的影響較大。去除流動相中的溶解氧，將大大提高紫外檢測器的性能，并提高某些熒光檢測應(yīng)用中的靈敏度。常見的脫氣方法有：加熱煮沸、抽真空、超聲波、吹氦等。對于混合溶劑，采用抽氣或煮沸的方法，需考慮因溶劑揮發(fā)較低而引起的成分變化。

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怎樣選擇合適的瓶蓋和墊子

PTFE：純 PTFE墊片對大多數(shù)腐蝕性溶劑有較好的化學(xué)惰性，在單膜穿透后，不能重復(fù)密封。天然橡膠：適用于 GC/HPLC，密封性能好，穿透性好。PTFE/硅膠：通用的多功能隔墊材料，可定制多種軟硬度，以滿足不同針頭的要求，是大部分 GC/HPLC應(yīng)用的。預(yù)開的 PTFE/硅膠：開放的墊片中心有狹縫，便于穿，并且釋放大量樣品，以便將樣品瓶釋放出來，推薦在島津沃特世等針上的自動進樣器。PTFE/硅膠/PTFE：可有效避免硅膠掉渣，同時保持良好的再密封性能。PTFE/丁基：的帶 PTFE襯里的襯里。在125° C以下， PTFE層的丁基橡膠隔墊的密封性要好于沒有 PTFE面的隔墊，適合在125℃以下使用。密封性好，能有效抵抗大部分溶劑，減少掉渣，耐多次滲透。PTFE具有抗化學(xué)性能。

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進樣的選擇：一般液體進樣的進樣體積比較小，一般進樣都在10 ul以下，所以要選擇與進樣體積相近的進樣針，這樣可以保證取樣的準(zhǔn)確性，不能說拿50 ul的進樣針去1 ul或者拿10 ul的針去進小于1 ul的樣品，進樣體積和進樣針都要選擇合適。供氣量較大時，通常選用1 ml以上的。進樣前、后清洗：在使用自動進樣功能時，我們會對進樣前后針的清洗方法進行編輯，以消除樣品之間的交叉污染。也不要忘了手動進樣的這一步操作，液體進樣可先用樣品溶劑潤濕洗入樣針，然后用樣品潤洗三、三次后再將樣品注入氣相色譜中，氣體樣品可吸入空氣或氮氣，反復(fù)抽拉活塞桿，清洗氣體。