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原位雜交技術電話,武漢思特進

發(fā)布時間:2021-06-18 07:10  

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多彩色熒光原位雜交技術多彩色熒光原位雜交(Multicolor fluorescence in situ hybridization,mFISH)是在熒光原位雜交技術的基礎上發(fā)展起來的一種新技術,它用幾種不同顏色的熒光素單獨或混合標記的探針進行原位雜交,能同時檢測多個靶位,各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同,呈現多種色彩,因而被稱為多彩色熒光原位雜交。它克服了FISH技術的局限,能同時檢測多個基因,在檢測遺傳物質的突變和染色體上基因定位等方面得到了廣泛的應用(楊明杰等1998)。



原位雜交是指將特定標記的已知順序核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交,從而對特定核酸順序進行精3確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。

原位雜交技術(In situ hybridization,ISH)是分子生物學、組織化學及細胞學相結合而產生的一門新興技術,始于20世紀60年代。

原位PCR;原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術,在細胞(爬片、甩片或涂片)或組織(石蠟、冰凍切片)上直接對靶基因片段進行擴增,通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。



原位雜交;原位雜交(in situ hybridization)將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交,稱為原位雜交!

使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置。

以菌落原位雜交為例:對分散在若干個瓊脂平板上的少數菌落(100-200)進行克8隆篩選時,可采用本方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張硝5酸纖維素濾膜上。經培養(yǎng)一段時間后,對菌落進行原位裂解。主平板應貯存于4℃直至得到篩選結果。



在選用探針時經常會受到可利用探針種類的限制。如在建立DNA文庫時,手頭沒有篩選特定基因的克0隆探針,這時就可用寡核苷酸探針來代替。但必須首先純化該基因的編碼蛋白,并測定6個以上的末端氨基酸序列,通過反推的核苷酸序列合成一套寡核苷酸探針。如果已有其它動物的同種基因克0隆,因為人類和動物間在同一基因的核苷酸順序上存在較高的同源性,因此可利用已鑒定的動物基因作探針來篩選人類基因克0隆。對于基因核苷酸序列背景清楚而無法獲得克0隆探針時,可采用PCR方法擴增某段基因序列,并克0隆人合適的質粒載體中,即可得到自己的探針。這種方法十分簡便,無論基因組DNA探針還是cDNA探針都可以容易地獲得,而且,可以建立PCR的基因檢測方法,與探針雜交方法可作對比,可謂一舉兩得。