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發(fā)布時間:2020-12-21 05:38  
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廣州碩譜生物科技有限公司CN固相萃取柱批發(fā)
SPE小柱保留雜質(zhì)固相萃取操作一般有三步:
1)、活化--除去柱子內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境(注意整個過程不要使小柱干涸)。
2)、上樣--將樣品轉(zhuǎn)移入柱,此時大部分目標(biāo)化合物會隨樣品基液流出,雜質(zhì)被保留在柱上,故此步驟要開始收集(注意流速不要過快)。
洗脫---用小體積的溶劑將組分淋洗下來并收集,合并收集液(注意流速不要過快).
淋洗通常需要干燥,原因是什么?
回答:淋洗液一般都要干燥,主要考慮以下因素:
1.通常因為反相萃取用于化合物的預(yù)處理,正如反相萃取在色譜中是一種常見的分離方法,反相萃取中的淋洗液通常是一種水相或含水的緩沖溶液,除去水分,從而便于后續(xù)的干燥、濃縮步驟。
2.有些項目,在淋洗步驟完成后,直接用一定量的洗脫液,如1 ml甲1醇洗脫,這個過程將洗脫和定容集進行一步處理,前者的處理必然會對洗脫步驟的定量結(jié)果產(chǎn)
三、就是溶劑互溶問題,當(dāng)淋洗過程中使用的溶劑的極性與洗脫溶劑的極性相差很大時,就會產(chǎn)生1乳化分層,洗脫阻力大,洗脫液有被稀釋的危險等,從而導(dǎo)致洗脫效果不同,從而導(dǎo)致試驗結(jié)果的失敗。
固相萃取技術(shù)的復(fù)雜、難搞也是人所共知,下面列舉了一些固相萃取操作中的常見的問題及解決辦法,希望能對你的固相萃取操作有所幫助。
以下是固相萃取操作中常見的問題:
一、回收率低;
二、萃取重現(xiàn)性差;
三、凈化效果不理想;
四、SPE柱流速過低。
正相作用機理:
常見的極性固定相萃取材料包括:硅膠、氧化鋁、弗羅里硅土及含有qing基(CN)、氨基(NH2)、二醇基(2OH)的鍵合硅膠。
正相固相萃取模式下,溶劑體系的極性應(yīng)按照樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序逐漸升高,它們的洗脫強度也逐漸增大。必須保證選擇的樣品溶劑不能將目標(biāo)化合物洗脫,選擇的淋洗液應(yīng)在不洗脫目標(biāo)化合物的前提下zui大限度地洗脫干擾物,所以洗脫液應(yīng)能恰好完全洗脫目標(biāo)化合物。
固相萃取知識
離子交換固相萃取柱種類的選擇:為了能夠有效地將被吸附的離子化合物洗脫出來,對于含有強離子官能團的目標(biāo)化合物一般選用弱離子交換柱;而對于含有弱離子官能團的化合物,則可選用強離子交換柱。這樣可以避免目標(biāo)化合物和吸附劑官能團同時處于離子化狀態(tài),導(dǎo)致目標(biāo)化合物始終處于的保留狀態(tài)無法被洗脫。
色譜柱維護-反相柱
流動相
所有流動相,特別是含有緩沖鹽的流動相,zui好當(dāng)日實驗當(dāng)日配制;如果使用了前日配制的流動相,請確保流動相pH值沒有變化,并確保流動相沒有長菌。 流動相的pH值取決于您的應(yīng)用和色譜柱填料類型。我們建議在所有的色譜柱盡量在pH2~8范圍內(nèi)使用。請盡量避免在常規(guī)流動相中使用很高比例的水(>95%)作為流動相,可能會造成保留時間的不穩(wěn)定或者色譜柱鍵合相的損害。如果使用高比例水或者100%水相為流動相,建議使用親水柱。