ELISA試劑盒的測定原理

測定技術的基礎在于抗原之間的特異結(jié)合反應，所以任何的診斷劑離不開好的原料，如抗原，酶等。以前用于測定的抗原通常為各種純化抗原，而則為純化抗原動物后獲得的多和使用雜交瘤技術得到的，而抗原或的標記物如酶標結(jié)合物則通過各種化學合成方法制備。近年來，隨著分子生物學的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或及其酶結(jié)合物等測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。

ELISA試劑盒的用途

ELISA的基礎是抗原或的固相化及抗原或的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或仍保持其活性，酶標記的抗原或既保留其活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的或抗原）與固相載體表面的抗原或起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原復合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或，也通過反應而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了反應的結(jié)果，使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定。

然而，影響Elisa試驗結(jié)果的因素很多，故加強各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學的優(yōu)點。

Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案

背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2） 

1  洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留 洗液準確配制；充分洗滌，靜置15秒，徹底拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用，不要反復使用，否則易造成污染。

2  底物污染，未避光保存，出現(xiàn)顏色 棄去底物，重新配置

3  樣品稀釋液污染 棄去稀釋液，重新配置

4  吸頭重復使用，未洗凈或消毒不徹底 吸頭盡可能一次性使用

5  不正確的孵育時間，溫度（尤其是底物孵育的時間） 常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。完全按照說明書要求。

6  偶聯(lián)抗體（streptavidin-HRP）濃度過高 按照說明書調(diào)整到合適的濃度

7  ELISA板子不正確的貯存 酶標板貯存于2-8 ℃；使用結(jié)合力低點的Elisa板

8  沒有正確封閉 在標準品稀釋液中加入動物蛋白或延長封閉時間

9  樣本溶血嚴重 建議使用非溶血或輕微溶血樣本，嚴重溶血樣本會導致背景偏高。