{微生物檢測(cè)}微生物接種

將微生物接到適于它生長(zhǎng)繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過(guò)程叫做接種。

接種和分離工具

1.接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.5.玻璃涂棒 6.接種圈 7.接種鋤 8.小解剖刀

常用的接種方法有以下幾種：

1、劃線接種

這是zui常用的接種方法。即在固體培養(yǎng)基表面作來(lái)回直線形的移動(dòng)，就可達(dá)到接種的作用。常用的接種工具有接種環(huán)，接種針等。在斜面接種和平板劃線中就常用此法。

2、三點(diǎn)接種

在研究霉菌形態(tài)時(shí)常用此法。此法即把少量的微生物接種在平板表面上，成等邊三角形的三點(diǎn)，讓它各自獨(dú)立形成菌落后，來(lái)觀察、研究它們的形態(tài)。除三點(diǎn)外，也有一點(diǎn)或多點(diǎn)進(jìn)行接種的。

3、穿刺接種

在保藏yanyang junzhong或研究微生物的動(dòng)力時(shí)常采用此法。13-2012食品安全標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)GB4789。做穿刺接種時(shí)，用的接種工具是接種針。用的培養(yǎng)基一般是半固體培養(yǎng)基。它的做法是：用接種針蘸取少量的junzhong，沿半固體培養(yǎng)基中心向管底作直線穿刺，如某細(xì)菌具有鞭毛而能運(yùn)動(dòng)，則在穿刺線周?chē)軌蛏L(zhǎng)。

穿刺接種的兩種方法：垂直法和水平法

抑菌效力

接種大腸埃希菌、金黃色球菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)；接種白色的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，20～25℃培養(yǎng)24～48小時(shí)。上述培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為50～100cfu的菌懸液。③傾注法:取少許含菌材料放入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，然后傾入已融化并已冷卻至48℃左右的瓊脂滅菌培養(yǎng)基，搖勻后冷卻凝固。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基中，20～25℃培養(yǎng)5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜方法吸出孢子懸液至無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)50～100cfu的孢子懸液。

微生物限度檢查

陰性對(duì)照

   為確認(rèn)試驗(yàn)條件是否符合要求，應(yīng)進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)，陰性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。如陰性對(duì)照有菌生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)查。

   培養(yǎng)基適用性檢查

   微生物計(jì)數(shù)用的成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按chu方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查。

   按表1規(guī)定，接種不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基管或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板，置表1規(guī)定條件下培養(yǎng)。每一試驗(yàn)菌株平行制備2管或2個(gè)平皿。同時(shí)，用相應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。

   被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致；被檢液體培養(yǎng)基管與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，試驗(yàn)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好。

4.供試品中微生物的回收

    微生物的回收可采用平皿法、薄膜過(guò)濾法或MPN法。

   （1）平皿法 平皿法包括傾注法和涂布法。表1中每株試驗(yàn)菌每種培養(yǎng)基至少制備2個(gè)平皿，以算術(shù)均值作為計(jì)數(shù)結(jié)果。

   傾注法 取照上述“供試液的制備” “接種和稀釋”和“抗jun活性的去除或滅活” 制備的供試液1ml，置直徑90mm的無(wú)菌平皿中，注入15～20ml溫度不超過(guò)45℃熔化的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。若使用直徑較大的平皿，培養(yǎng)基的用量應(yīng)相應(yīng)增加。將微生物接到適于它生長(zhǎng)繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過(guò)程叫做接種。按表1規(guī)定條件培養(yǎng)、計(jì)數(shù)。同法測(cè)定供試品對(duì)照組及菌液對(duì)照組菌數(shù)。計(jì)算各試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)。

   涂布法 取15～20ml溫度不超過(guò)45℃的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，注入直徑90mm的無(wú)菌平皿，凝固，制成平板，采用適宜的方法使培養(yǎng)基表面干燥。若使用直徑較大的平皿，培養(yǎng)基用量也應(yīng)相應(yīng)增加。——食品微生物項(xiàng)目背景——食源病原微生物引起的食源性疾病是食品安全的核心問(wèn)題。每一平板表面接種上述照“供試液的制備” “接種和稀釋” 和“抗jun活性的去除或滅活”制備的供試液不少于0.1ml。按表1規(guī)定條件培養(yǎng)、計(jì)數(shù)。同法測(cè)定供試品對(duì)照組及菌液對(duì)照組菌數(shù)。計(jì)算各試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)。