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發(fā)布時間:2020-11-30 04:21  
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Tris通常被用于核酸DNA或RNA的瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液,通常用的緩沖體系有TAE、TBE、TPE等,即生物緩沖劑Tris配合EDTA以及醋酸、硼酸、磷酸等配制成的緩沖溶液。不同公司使用的緩沖液有所差異,相對來說使用磷酸的TPE較少,主要是使用TAE和TBE緩沖液。在做核酸瓊脂糖凝膠電泳時,首先的準備工作就是制備凝膠,瓊脂糖凝膠做的好壞直接影響電泳效果和效率。這個制作過程耗時較長,節(jié)約時間考慮也可以直接購買制備好的預制凝膠。
提到緩沖液就不得不延伸一下,這就是Henderson-Hasselbalch方程。
在前面提到,
將等式同時取對數(shù),并簡化就可以得到:
或者
這就是Henderson-Hasselbalch方程。
注意:式子中酸及其共軛堿的濃度都是平衡時的濃度,除了酸性過于強的情況下,由于同離子效應的存在,一般都可用此式計算。
此外,一些緩沖體系對溫度非常敏感,例如Tris-HCl緩沖液,如果你在25℃時將緩沖體系調至pH值8,pH值將在5℃時增加到8.58而在37℃時降到7.71。所以,如果打算在4℃條件下保存蛋白或在37℃進行實驗,就應該考慮到室溫下調的pH值可能在實驗條件中就不適用了。 其他類型的色譜分離柱,如凝膠過濾柱和Ni2 親和層析柱,可能需要更高的鹽濃度。我一般用高達500 mM NaCl進行高鹽淋洗,以防止蛋白和柱之間的非特異性結合。