激酶、磷酸酶、磷酸化酶的區(qū)別？

激酶催化磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移反應(yīng)，比如己糖激酶。

磷酸酶催化磷酸基團(tuán)的水解，與激酶正好相反。

磷酸化酶催化磷酸解反應(yīng)，比如糖原磷酸化酶，催化糖原生成磷酸葡萄糖。這其實(shí)是磷酸解，要是水解就生成葡萄糖了。當(dāng)然一般習(xí)慣上還是說(shuō)水解。

激酶催化的反應(yīng)一般也叫磷酸化，這沒(méi)什么錯(cuò)誤，只是和磷酸化酶容易混淆。

DNA新鏈的延伸由DNA聚合酶 III所催化。為了copy的不斷進(jìn)行，解旋酶須沿著模板前進(jìn), 邊移動(dòng)邊解開(kāi)雙鏈。由于DNA的解鏈，在DNA雙鏈區(qū)勢(shì)必產(chǎn)生正超螺旋，在環(huán)狀DNA中更為明顯，當(dāng)達(dá)到一定程度后就可能造成copy叉難以再繼續(xù)前進(jìn)，但在細(xì)胞內(nèi)DNA的copy不會(huì)因出現(xiàn)拓?fù)鋵W(xué)問(wèn)題而停止，因?yàn)橥負(fù)洚悩?gòu)酶會(huì)解決這一問(wèn)題。

隨著引發(fā)體合成RNA引物，DNA聚合酶 III開(kāi)始不斷地將引物延伸，合成DNA。DNA聚合酶 III是一個(gè)多亞基復(fù)合二聚體，一個(gè)單體用于前導(dǎo)鏈的合成，另一個(gè)單體用于滯后鏈的合成，因此它可以在同一時(shí)間分別copyDNA前導(dǎo)鏈和滯后鏈。雖然DNA前導(dǎo)鏈和滯后鏈copy的方向不同，但如果滯后鏈模板環(huán)繞DNA聚合酶III,并通過(guò)DNA聚合酶 III,然后再折向未解鏈的雙鏈DNA的方向，則滯后鏈的合成可以和前導(dǎo)鏈的合成在同一方向進(jìn)行。

所有合成cDNA條鏈的方法都要用依賴于RNA的DNA聚合酶(反轉(zhuǎn)錄酶)來(lái)催化反應(yīng)，主要有兩個(gè)關(guān)鍵因素，一個(gè)是mRNA模板，另一個(gè)是反轉(zhuǎn)錄酶 [3]  。商品化反轉(zhuǎn)錄酶有從禽類(lèi)成髓細(xì)胞瘤病毒純化到的禽類(lèi)成髓細(xì)胞病毒（AMV）逆轉(zhuǎn)錄酶和從表達(dá)化的Moloney鼠病毒反轉(zhuǎn)錄酶基因的大腸中分離到的鼠病毒（MLV）反轉(zhuǎn)錄酶。AMV反轉(zhuǎn)錄酶包括2個(gè)具有若干種酶活性的多肽亞基，這些活性包括依賴于RNA的DNA合成，依賴于DNA的DNA合成以及對(duì)DNA-RNA雜交體的RNA部分進(jìn)行內(nèi)切降解（RNA酶H活性）。MLV反轉(zhuǎn)錄酶只有單個(gè)多肽亞基，兼?zhèn)湟蕾囉赗NA和依賴于DNA的DNA合成活性，但降解DNA—RNA雜交體中的RNA的能力較弱。且其熱穩(wěn)定性較AMV反轉(zhuǎn)錄酶差。MLV反轉(zhuǎn)錄酶能合成較長(zhǎng)的eDNA（如大于2～3kb）。AMV反轉(zhuǎn)錄酶和MI。V反轉(zhuǎn)錄酶利用RNA模板合成cDNA時(shí)的適pH、適鹽濃度和適溫度各不相同．所以合成鏈時(shí)相應(yīng)調(diào)整條件是非常重要的。

自身引導(dǎo)法 [3]  。合成的單鏈eDNA3’端能夠形成一短的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，這就為第二鏈的合成提供了現(xiàn)成的引物。當(dāng)鏈合成反應(yīng)產(chǎn)物的DNA—RNA雜交鏈變性后利用大腸DNA聚合酶I Klenow片段或反轉(zhuǎn)錄酶合成eDNA第二鏈，用對(duì)單鏈特異性的S1核酸酶消化該環(huán)，即可進(jìn)一步。但自身引導(dǎo)合成法較難控制反應(yīng)，而且用S1核酸酶切割發(fā)夾結(jié)構(gòu)時(shí)無(wú)一例外地將導(dǎo)致對(duì)應(yīng)于mRNA5’端序列出現(xiàn)缺失和重排，因而該方法很少使用。