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發(fā)布時間:2021-06-29 03:00  

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轉(zhuǎn)基因植株的構(gòu)建是現(xiàn)代植物生物學非常重要的先決條件。而載體作為外源基因 進入目標植物的基因組的轉(zhuǎn)運者,在轉(zhuǎn)基因植株的生成方面扮演著非常重要的角色。然而 隨著研究人員對多個蛋白之間關(guān)系W及多基因共同控制植物生長發(fā)育研究的需要,尤其是 多蛋白的相互作用,W前的單基因載體已經(jīng)不能滿足現(xiàn)在的需要。所W研究人員需要一種有效的方法來轉(zhuǎn)化多基因進入植物內(nèi)W獲得同時表達多個基因的轉(zhuǎn)基因植株。


蛋白表達系統(tǒng)

蛋白表達系統(tǒng)是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系。通過這個體系可以實現(xiàn)外源基因在宿主中表達的目的。一般由以下幾個部分組成:

1、宿主。表達蛋白的生物體??梢詾榧毦?、酵母、植物細胞、動物細胞等。由于各種生物的特性不同,適合表達蛋白的種類也不相同。

2、載體。載體的種類與宿主相匹配。根據(jù)宿主不同,分為原核(細菌)表達載體、酵母表達載體、植物表達載體、哺乳動物表達載體、昆蟲表達載體等。載體中含有外源基因片段。通過載體介導,外源基因可以在宿主中表達。

3、輔助成分。有的表達系統(tǒng)中還包括了協(xié)助載體進入宿主的輔助成分。比如昆蟲-桿狀病毒表達體系中的桿狀病毒。


folin―酚試劑法(lowry法)是蛋白質(zhì)測定法中較靈敏的方法之一。過去此法是應(yīng)用相對廣泛的一種方法,由于其試劑乙的配制較為困難(現(xiàn)在已可以訂購),近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即folin―酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質(zhì)的靈敏度。這兩種顯色反應(yīng)產(chǎn)生深蘭色的原因是:在堿性條件下,蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復合物。folin―酚試劑中的磷鉬酸鹽―磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原,產(chǎn)生深蘭色(鉬蘭和鎢蘭的混合物)。在一定的條件下,蘭色深度與蛋白的量成正比。


蛋白質(zhì)是由氨基酸以“脫水縮合”的方式組成的多肽鏈經(jīng)過盤曲折疊形成的具有一定空間結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。蛋白質(zhì)中一定含有碳、氫、氧、氮元素,也可能含有硫、磷等元素。蛋白質(zhì)是由α-氨基酸按一定順序結(jié)合形成一條多肽鏈,再由一條或一條以上的多肽鏈按照其特定方式結(jié)合而成的高分子化合物。蛋白質(zhì)就是構(gòu)成人體組織的支架和主要物質(zhì),在人體生命活動中,起著重要作用,可以說沒有蛋白質(zhì)就沒有生命活動的存在。