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發(fā)布時間:2021-04-15 07:35  

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ELISA試劑盒的操作方法——間接法

以下是北京中檢維康生物技術(shù)有限公司為您一起分享的內(nèi)容,北京中檢維康生物技術(shù)有限公司專業(yè)供應(yīng)ELISA試劑盒,歡迎新老客戶蒞臨。

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;

2.次日洗滌3次;

3.加一定稀釋的待檢樣品(未知)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;

4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二(抗)0.1ml;

5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;

6.然后用DDW洗滌。

其余步驟同“雙夾心法”的4、5、6。



ELISA試劑盒的應(yīng)用領(lǐng)域

ELISA法是診斷中的一項新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的病種等方面的診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,也適合于流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測定,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴大,可概括四個方面:

1、酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。

2、研究抗酶的合成。

3、顯現(xiàn)微量的沉淀反應(yīng)。

4、定量檢測體液中抗原或成份。



ELISA試劑盒——ELISA實驗通用規(guī)則

1、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。

2、洗板時,每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加徹底。倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報紙或毛紙上用力拍干。
3、洗液不夠時,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
4、底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配。
5、檢測前,要打開酶標(biāo),使之穩(wěn)定10分鐘以上。
6、底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸。
7、待檢樣品要澄清,否則會影響結(jié)果。
8、溫浴時間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。
9、應(yīng)盡量做雙孔實驗,這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
10、對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。