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發(fā)布時間:2021-01-20 09:13  
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原位雜交(In Situ Hybridization)也叫原位雜交組化(in situ hybridization histochemistry, ISHH),是一種固相分子雜交的方法,bai它是用標(biāo)記的DNA或RNA為探針,在原位檢測組織或細胞內(nèi)特定核酸序列的方法。探針的種類按所帶標(biāo)記物可分為同位素標(biāo)記探針和非同位素標(biāo)記探針兩大類。常用的同位素標(biāo)記物有3H、35S、125I和32P,非同位素標(biāo)記物中目前很常用的有生物素、地高6辛和熒光素三種。探針的種類按核酸性質(zhì)不同又可分為DNA探針、cDNA探針、RNA探針和合成寡核苷酸探針。
原位雜交術(shù)可在原位檢測細胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達,有很高的敏感性和特異性,已成為細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。
多種探針標(biāo)記檢測系統(tǒng)
基于地高3辛、生物素和熒光標(biāo)記分子的標(biāo)記和檢測系統(tǒng)是常見的原位雜交檢測方法。
熒光標(biāo)記檢測常為直接探針標(biāo)記方法,如在dUTP/UTP/ddUTP上連接Fluorescein后進行核酸標(biāo)記。由于標(biāo)記在核酸上的熒光分子必須經(jīng)受雜交和洗脫過程中的考驗,以及熒光分子易于衰減,其檢測靈敏度受到一定的影響。但對熒光分子的直接檢測呈現(xiàn)的背景較低。
多彩色熒光原位雜交技術(shù):顯而易見,是熒光原位雜交的升級版,采用多個熒光來檢測,目前的發(fā)展及運用也是較多的。
原位PCR:將原位雜交結(jié)合PCR技術(shù)發(fā)展起來的實驗方法。
基因組原位雜交技術(shù):該技術(shù)在我們的領(lǐng)域可能運用的畢竟少,主要是根據(jù)物種DNA同源性差異實現(xiàn),在農(nóng)作物等的雜交育種上運用較廣,
武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術(shù)研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實驗中心有分子生物學(xué)平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。
原位雜交組織(或細胞)化學(xué)技術(shù)簡稱原位雜交(In situ hybridization, ISH)是應(yīng)用已知堿基順序并帶有標(biāo)記物的核酸探針與組織細胞內(nèi)待測的核酸,按堿基互補配對原則進行特異性結(jié)合,形成雜交體,然后用與標(biāo)記物相應(yīng)的檢測系統(tǒng),通過組織化學(xué)或免3疫組織化學(xué)方法在核酸原有位置進行細胞內(nèi)定位、定性和定量研究。為分子水平研究細胞內(nèi)基因表達及有關(guān)細胞5因子的調(diào)控提供了有效的工具??梢暈榻M織化學(xué)與免3疫組織化學(xué)的重大突破。
原位雜交不需要從組織中提取核酸,對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,并可完整地保護組織和細胞的形態(tài),更能準(zhǔn)確地反映出組織細胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。
