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食品加工廠核酸提取純化專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì)在線(xiàn)服務(wù)【勱博儀器】

發(fā)布時(shí)間:2020-12-18 19:12  

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豬流行性腹瀉病毒和非洲病毒都具有在豬源原料中存活的能力;然而,作用機(jī)制目前尚不清楚。根據(jù)應(yīng)對(duì)流行性腹瀉病毒的經(jīng)驗(yàn),在不影響動(dòng)物性能和飼料成本的情況下,替換原料的可行性使得很多生產(chǎn)者不再使用豬源原料。研究表明熱工過(guò)程可以殺滅病毒(如流行性腹瀉病毒),但這只能作為緊急緩解措施,因?yàn)檫@要求產(chǎn)品在干燥和運(yùn)輸過(guò)程中必須不存在交叉污染。研究表明熱工過(guò)程可以殺滅病毒(如流行性腹瀉病毒),但這只能作為緊急緩解措施,因?yàn)檫@要求產(chǎn)品在干燥和運(yùn)輸過(guò)程中必須不存在交叉污染。如果生產(chǎn)者認(rèn)可排除豬源原料是可行的,那么還應(yīng)該考慮到那些間接的豬源原料,像添加劑、基礎(chǔ)混合物和那些可能源于豬源的動(dòng)物蛋白或脂肪等。

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首先,養(yǎng)豬場(chǎng)(戶(hù))真正了解所使用的飼料原料的供應(yīng)鏈非常重要。包括:從誰(shuí)那里購(gòu)買(mǎi)了原料?他們又從哪里買(mǎi)到?在運(yùn)輸中是否與其他原料混雜或混合?每個(gè)中轉(zhuǎn)地點(diǎn)的生物安全政策是什么?這些對(duì)于正確評(píng)估原料攜帶外來(lái)動(dòng)物疾病的風(fēng)險(xiǎn)非常重要。其次,飼料廠要注重生物安全。在不使用時(shí)蓋住接收坑,有效地控制害蟲(chóng),防止灰塵收集系統(tǒng)中的灰塵再循環(huán)回到飼料中,并管理好整個(gè)工廠的人員移動(dòng)。后,養(yǎng)豬場(chǎng)和飼料廠要考慮監(jiān)測(cè)環(huán)境,以實(shí)現(xiàn)生物安全合規(guī)性。環(huán)境監(jiān)測(cè)在人類(lèi)食品和寵物食品行業(yè)已經(jīng)成為常規(guī)舉措,可以幫助人們發(fā)現(xiàn)生物安全計(jì)劃中的薄弱環(huán)節(jié)。滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡臒晒饣瘜W(xué)物質(zhì)包括DNA結(jié)合染料和熒光標(biāo)記的序列特異引物或探針。


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在real-time Q-PCR技術(shù)中,無(wú)論是相對(duì)定量還是標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量方法仍存在一些PCR定量方法均有的問(wèn)題有待解決。在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量中,標(biāo)準(zhǔn)品的制備是一個(gè)必不可少的過(guò)程。目前由于無(wú)一統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),各個(gè)實(shí)驗(yàn)室所用的生成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的樣品各不相同,致使實(shí)驗(yàn)結(jié)果缺乏可比性。當(dāng)互補(bǔ)序列出現(xiàn)時(shí),探針與DNA雜交,探針轉(zhuǎn)變成一個(gè)開(kāi)放的結(jié)構(gòu),呈線(xiàn)性,報(bào)告熒光基團(tuán)與淬滅熒光基團(tuán)彼此在空間上產(chǎn)生足夠的分離,熒光基團(tuán)脫離了淬滅基團(tuán)的影響,從而產(chǎn)生可被檢測(cè)到的熒光。此外,用real-time Q-PCR來(lái)研究mRNA時(shí),受到不同RNA樣本存在不同的逆轉(zhuǎn)錄(RT)效率的限制。在相對(duì)定量中,其前提是假設(shè)內(nèi)源控制物不受實(shí)驗(yàn)條件的影響的,合理地選擇合適的不受實(shí)驗(yàn)條件影響的內(nèi)源控制物也是實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠與否的關(guān)鍵。

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與傳統(tǒng)的PCR技術(shù)相比,Real-time Q-PCR的不足之處是:(1)由于運(yùn)用了封閉的檢測(cè),減少了擴(kuò)增后電泳的檢測(cè)步驟,因此也就不能監(jiān)測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的大?。荒壳坝捎跓o(wú)一統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),各個(gè)實(shí)驗(yàn)室所用的生成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的樣品各不相同,致使實(shí)驗(yàn)結(jié)果缺乏可比性。(2)因?yàn)闊晒馑胤N類(lèi)以及檢測(cè)光源的局限性,從而相對(duì)地限制了real-time Q-PCR的復(fù)合式(multiplex)檢測(cè)的應(yīng)用能力;(3)目前real-time Q-PCR實(shí)驗(yàn)成本比較高,從而也限制了其廣泛的應(yīng)用。


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隨著定量PCR儀設(shè)計(jì)上的不斷改進(jìn),對(duì)溫度控制的精密性越來(lái)越高,出現(xiàn)了像Rotor-Gene這樣的管間溫度均一性達(dá)±0.01℃的定量PCR儀,而該公司新近推出的Rotor-Gene6000更可達(dá)到±0.02℃的溫度分辨率。溫度上的高分辨率使得運(yùn)用定量PCR儀進(jìn)行高分辨率熔解曲線(xiàn)(HRM)分析基因型成為可能。高分辨率熔解曲線(xiàn)根據(jù)序列長(zhǎng)度、GC含量和互補(bǔ)性分析樣品。熒光定量PCR結(jié)果可以用于定性(判斷一段序列的有無(wú)),也可以用于定量(確定DNA拷貝數(shù)),即qPCR,而常規(guī)PCR只能做半定量。不同的核酸序列,哪怕僅有一個(gè)堿基的差異,也會(huì)體現(xiàn)在熔解溫度的差別上。

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PCR是1985年開(kāi)始出現(xiàn)的一項(xiàng)基因檢測(cè)技術(shù),由于PCR技術(shù)具有簡(jiǎn)便易行、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),該技術(shù)被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究,成為分子生物學(xué)必不可少的研究工具。但在許多情況下,研究者們已不再滿(mǎn)足于得知某一特異DNA序列的存在與否,他們更著眼于對(duì)其進(jìn)行精i確的核酸定量。因而,借助PCR對(duì)基因快速、敏感、特異而準(zhǔn)確的定量成為目前分子生物學(xué)技術(shù)研究的熱點(diǎn)之一。Ct值的含義是:每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR( real-time quantitative PCR, RQ PCR)技術(shù)實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,它以其特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、定量準(zhǔn)確、速度快、全封閉反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)成為分子生物學(xué)研究中的重要工具。