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冷凍食品加工公司熒光定量PCR給您好的建議

發(fā)布時間:2020-08-25 05:06  

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一、在動物檢疫中對生豬及其產品開展非洲病毒檢測,應當使用我部批準或經中國動物疫病預防控制中心比對符合要求的檢測方法及檢測試劑盒(試紙條),確保檢測結果準確。廣州勱博--養(yǎng)殖場熒光定量PCR相對常規(guī)PCR而言,熒光定量PCR的主要優(yōu)點是準確地確定初始模板拷貝數和寬的動態(tài)范圍內和高的靈敏度。符合要求的檢測方法及檢測試劑盒(試紙條)可從中國動物疫病預防控制中心網站查詢。二、應急期間,比對符合要求的檢測試劑盒(試紙條)可使用至2019年6月30日。三、各地畜牧獸醫(yī)管理部門要加強對非洲病毒檢測試劑盒(試紙條)生產企業(yè)及其產品質量監(jiān)管,確保產品質量符合要求。


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豬肉制品加工企業(yè)在生豬產品原料中檢出非洲病毒核酸陽性的,應當立即封存陽性樣品的同批次原料并報告所在地市場監(jiān)管、畜牧獸醫(yī)部門,并將陽性樣品送至具有檢測資質的單位復檢。廣州勱博--冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠核酸提取純化一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數擴增階段和平臺期。復檢為陽性的,企業(yè)要在當地市場監(jiān)管、畜牧獸醫(yī)部門監(jiān)督下,按規(guī)定對同批次生豬產品原料進行無害化處理,對相關場所進行徹i底清洗消毒。


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一般情況下,高溫消毒時,60℃就可以將多數病原殺滅,但汽i油噴燈溫度達幾百度,噴燈火焰一掃而過,也不會殺滅病原,因時間太短。蒸煮消毒:在水開后30分鐘卻可以將病原殺i死。自動化操作提高了工作效率,反應快速、重復性好、靈敏度高、特異性強、結果清晰。紫外線照射:必須達到5分鐘以上。注意:這里說的時間,不單純是消毒所用的時間,更重要的是病原體與消毒i藥接觸的有效時間。因為病原體往往附著于其他物質上面或中間,消毒i藥與病原接觸需要先滲透,而滲透則需要時間,有時時間會很長。

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消毒i藥在殺滅病原的同時往往自身也被破壞,一個消毒i藥分子可能只能殺i死一個病原,如果一個消毒i藥分子遇到五個病原,再好的消毒i藥也不會有效果。廣州勱博--博日養(yǎng)豬場全自動核酸提取純化系統(tǒng)實時熒光定量PCR的基本原理:理論上,PCR過程是按照2n(n代表PCR循環(huán)的次數)指數的方式進行模板的擴增。關于消毒i藥的用量,一般是每平方米面積用1升藥液。生產上常見到的則是不經計算,只是在消毒i藥將舍內全部噴濕即可,人走后地面馬上干燥,這樣的消毒效果是很差的,因為消毒i藥無法與掩蓋在深層的病原接觸。


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一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數擴增階段和平臺期。分子遺傳學診斷技術多以遺傳物質DNA為檢測對象,不需要進行細胞培養(yǎng),為傳統(tǒng)的細胞染色體核型分析技術提供了有效的補充。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋, 無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數。只有在熒光信號指數擴增階段, PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值.

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什么是熒光定量PCR?常規(guī)PCR中,擴增產物(擴增子)是通過終點法來分析檢測,即PCR反應結束后,DNA通過瓊脂糖凝膠電泳,然后進行成像分析。而熒光定量PCR可以在反應進行過程中進行累積擴增產物的分析和檢測,即“實時”。廣州勱博--養(yǎng)殖場核酸提取純化在PCR反應早期,產生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別,而后熒光的產生進入指數期、線性期和最終的平臺期,因此可以在PCR反應處于指數期的某一點上來檢測PCR產物的量,并且由此來推斷模板最i初的含量。在反應體系中加入熒光分子,通過熒光信號的按比例增加來反應DNA量的增加,使PCR產物的實時檢測成為可能。滿足實驗目的的熒光化學物質包括DNA結合染料和熒光標記的序列特異引物或探針;專門的熱循環(huán)儀配備熒光檢測模塊,用于監(jiān)測擴增時的熒光,檢測到的熒光信號反映了每個循環(huán)擴增產物的量。


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相對定量可以對每個樣本中模版的其實水平之間的差異進行精i確比較,沒必要知道模版的確切拷貝數,并且樣本模板中的相對水平不用使用標準曲線就可以確定。相對定量分析以實時PCR方式執(zhí)行,在實時PCR分析過程中,PCR基因擴增一直在監(jiān)控中,在PCR進行期間進行數據采集,而不是在PCR結束時(終點PCR)才獲取數據。在real-timeQ-PCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴增相關的熒光信號,隨著反應時間的進行,監(jiān)測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲線。在實時PCR中,反應是在目標的擴增早被監(jiān)測到時用循環(huán)中的時間點來描述的,而不是在PCR結束時通過目標的累計數來描述。

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在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異?;蛘吒鶕嶋H情況,在生豬進場前以生豬運輸車輛為單位采集全部生豬血液樣品,混合后進行檢測。