高效液相色譜

高效液相色譜與光譜技術(shù)聯(lián)用方法的研究也一直是色譜學(xué)科的研究熱點(diǎn)。20世紀(jì)80年代，可同時(shí)得到每個(gè)組分HPLC-UV三維譜圖的二極管陣列檢測(cè)器（DAD）問(wèn)世，對(duì)紫外-可見(jiàn)光譜的快速掃描檢測(cè)，使液相色譜能提供的信息大幅度增加，為模式識(shí)別等化學(xué)計(jì)量學(xué)中的許多手段提供了重要的應(yīng)用領(lǐng)域。90年代以后，HPLC-MS、HPLC-FTIR等色譜-光譜聯(lián)用技術(shù)逐漸成熟，為解決HPLC定性問(wèn)題提供了多種實(shí)用、有效的手段。

為適應(yīng)生命科學(xué)的發(fā)展，以制備色譜為主要對(duì)象的非線性色譜獲得了長(zhǎng)足的發(fā)展，人們運(yùn)用色譜法已能夠制備微量而貴重的生物活性化合物。而為了滿足天然產(chǎn)物分離制備、生物制藥等方面的需要，大規(guī)模的工業(yè)色譜技術(shù)、模擬移動(dòng)床色譜技術(shù)得到發(fā)展，目前，日處理量達(dá)到千克級(jí)的液相色譜系統(tǒng)已經(jīng)隨處可見(jiàn)。

高效液相色譜儀-色譜柱的使用和保養(yǎng) 

色譜柱是高效液相色譜儀主要的部件，被測(cè)物質(zhì)能否被很好的分離和測(cè)定，色譜柱的性能起著決定性的作用。因此，在日常工作中，應(yīng)特別注意色譜柱的正確使用和維修保養(yǎng)，以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。

1、使用預(yù)柱和保護(hù)柱。

預(yù)柱(pre-column)安裝于泵和進(jìn)樣器之間，它給色譜柱中的流動(dòng)相提供了完全的平衡，并防止了對(duì)柱填料有破壞作用的組分或污染物進(jìn)入色譜柱。保護(hù)柱(guard column)可以阻擋能夠牢固地吸附于色譜柱上的組分進(jìn)入色譜柱，保護(hù)柱應(yīng)與色譜柱的填料相同。預(yù)柱和保護(hù)柱可以經(jīng)常更換，而不需要經(jīng)常更換色譜柱，這就延長(zhǎng)了色譜柱的使用壽命。

2、防止氣體進(jìn)入色譜柱。

有些色譜柱(如凝膠柱)是不允許氣泡進(jìn)入的，否則將會(huì)使柱效降低甚至形成微小的難以驅(qū)除的氣室。因此，為了防止氣泡進(jìn)入色譜柱，一定要使用經(jīng)過(guò)脫氣的流動(dòng)相，并且要嚴(yán)格按照下列步驟來(lái)安裝色譜柱。a.拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲，觀察是否有溶劑滲出；b.如有溶劑滲出，即可將色譜柱接到管路上，以避免氣泡的進(jìn)入；c.如無(wú)溶劑滲出時(shí)，表明色譜柱的此端已經(jīng)進(jìn)去空氣了，此時(shí)，可將色譜柱的出口端接到進(jìn)樣閥上，以流動(dòng)相來(lái)反方向沖洗色譜柱，以便將柱內(nèi)的空氣排除。以0.2ml/min的小流量來(lái)沖色譜柱，如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會(huì)導(dǎo)致柱性能的降低；d.如果流出的溶劑里不含有氣泡，說(shuō)明柱內(nèi)的氣體已經(jīng)被排出了，再將色譜柱以正確的方向接好，這樣氣泡就進(jìn)不到色譜柱里面了。

3、色譜柱的清洗。

為了不使被測(cè)物質(zhì)和雜質(zhì)停留在色譜柱中，在每次的樣品分析工作完成之后，都應(yīng)及時(shí)地清洗色譜柱。

4、色譜柱的存放。

HPLC概述

液相色譜系統(tǒng)由泵及流路系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、色譜柱系統(tǒng)以及檢測(cè)器系統(tǒng)構(gòu)成，其中進(jìn)樣系統(tǒng)可細(xì)分為手動(dòng)進(jìn)樣與自動(dòng)進(jìn)樣，兩種進(jìn)樣方式均要求進(jìn)樣的準(zhǔn)確性與精密度。其中手動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)由于人為因素對(duì)進(jìn)樣的準(zhǔn)確性有很多大的影響，如人員的手動(dòng)進(jìn)樣熟練程度等，漸漸退出市場(chǎng)。而自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)，由于具有很高的準(zhǔn)確度以及精密度，幾乎排除人員因素的影響以及具有高通量、自動(dòng)運(yùn)行序列等特點(diǎn)而成為HPLC系統(tǒng)的標(biāo)配。

液相色譜進(jìn)樣系統(tǒng)位于泵后，色譜柱之前的高壓區(qū)域，如下圖所示。流動(dòng)相混合之后流經(jīng)進(jìn)樣系統(tǒng)，將樣品溶液帶入到色譜柱內(nèi)，完成進(jìn)樣。

液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？

①篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。

②存在干擾峰，解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子

③可能柱超載，減少進(jìn)樣量。

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