原位雜交技術(shù)基本原理

原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列，將有放6射性或非放6射性的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。

為顯示特定的核酸序列必須具備3個重要條件：組織、細胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標記物。

原位雜交(In Situ Hybridization)也叫原位雜交組化(in situ hybridization histochemistry, ISHH)，是一種固相分子雜交的方法，bai它是用標記的DNA或RNA為探針，在原位檢測組織或細胞內(nèi)特定核酸序列的方法。探針的種類按所帶標記物可分為同位素標記探針和非同位素標記探針兩大類。常用的同位素標記物有3H、35S、125I和32P，非同位素標記物中目前很常用的有生物素、地高6辛和熒光素三種。探針的種類按核酸性質(zhì)不同又可分為DNA探針、cDNA探針、RNA探針和合成寡核苷酸探針。

原位雜交術(shù)可在原位檢測細胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達，有很高的敏感性和特異性，已成為細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。

原位雜交 (ISH) 是用于定位固定組織和細胞中特定核酸靶標的強大技術(shù)，能夠獲得與基因表達和遺傳位點相關(guān)的時間和空間信息。 雖然ISH的基本工作流程與印跡雜交近似，即核酸探針被合成、標記、純化和特異性靶標退火，但其不同之處在于前者可通過可視化顯示組織內(nèi)的結(jié)果來獲得更多信息。 如今有兩種基本方法來實現(xiàn)可視化顯示原位RNA和DNA靶標，即熒光 (FISH) 和顯色 (CISH) 檢測。 每種檢測方法本身的特點（見下表）使得FISH和CISH適用于截然不同的應(yīng)用。 雖然兩種方法均使用標記的、與樣本雜交的靶標特異性探針，但每種方法用于可視化顯示樣本的儀器不同。 這里我們將強調(diào)每種方法的不同之處和各自的優(yōu)勢。

武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年，是一家以實驗技術(shù)研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術(shù)公司；公司實驗中心有分子生物學(xué)平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺；可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。

在選擇探針類型的同時，還需要選擇標記方法。探針的標記方法很多，選擇什么標記方法主要視個人的習(xí)慣和可利用條件而定。但在選擇標記方法時，還應(yīng)考慮實驗的要求，如靈敏度和顯示方法等。一般認為放0射性探針比非放0射性探針的靈敏度高。放0射性探針的實際靈敏度不依賴于所采用的標記方法，如隨機引物延伸法往往得到比缺口平移法更高的比活性 。在檢測單拷貝基因序列時，應(yīng)選用標記效0率0高、顯示靈敏的探針標記方法。在對靈敏要求不高時，可采用保存時間長的生物素探針技術(shù)和比較穩(wěn)定的堿性磷酸酶顯示系統(tǒng)。