實時熒光定量pcr儀

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實時熒光定量pcr儀，由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成，用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。

與實時設備相連的計算機收集熒光數據。數據通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數據被繪制成熒光強度相對于循環(huán)數的圖表。

原始數據收集后可以開始分析。實時設備的軟件能使收集到的數據進行正常化處理來彌補背景熒光的差異。正?；罂梢栽O定域值水平，這就是分析熒光數據的水平。

熒光定量PCR儀的優(yōu)勢

萊普特——熒光定量PCR儀專業(yè)供應商，我們?yōu)槟峁┮韵滦畔ⅰ?

樣品到達域值水平所經歷的循環(huán)數稱為Ct值（限制點的循環(huán)數）。域值應設定在使指數期的擴增效率為較大，這樣可以獲得準確，可重復性的數據。如果同時擴增的還有標有相應濃度的標準品，線性回歸分析將產生一條標準曲線，可以用來計算未知樣品的濃度。

熒光定量PCR儀的相關介紹

PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數方式增加的，隨著反應循環(huán)數的增加，終PCR反應不再以指數方式生成模板，從而進入平臺期。在傳統(tǒng)的PCR 中，常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應的終擴增產物，因此用此終點法對PCR產物定量存在不可靠之處。

在real-time Q-PCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴增相關的熒光信號，隨著反應時間的進行，監(jiān)測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲 線。在PCR反應早期，產生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別，而后熒光的產生進入指數期、線性期和終的平臺期，因此可以在PCR反應處于指數期的某一點 上來檢測PCR產物的量，并且由此來推斷模板當初的含量。

熒光定量PCR的原理

PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步?；蛘呤褂脽晒馊玖蟂YBR。SYBR可以結合到雙鏈DNA上面，當體系中的模板被擴增時，SYBR可以有效結合到新合成的雙鏈上面，隨著PCR的進行，結合的SYBR染料越來越多，被儀器檢測到的熒光信號越來越強，從而達到定量的目的。