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發(fā)布時(shí)間:2020-12-31 04:56  
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PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)可以是分散或組合的形式。完成一組PCR實(shí)驗(yàn),通常有四個(gè)實(shí)驗(yàn)過程:試劑制備、樣品處理、核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析。如果實(shí)驗(yàn)過程需要,應(yīng)增加樣品粉碎過程。
分散形式PCR實(shí)驗(yàn)室
所謂分散式PCR實(shí)驗(yàn)室,是指完成上述實(shí)驗(yàn)過程的各個(gè)實(shí)驗(yàn)室相互遠(yuǎn)離,分散布置。對(duì)于這種布置形式的PCR實(shí)驗(yàn)室,由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)之間不易相互干擾,因此無需特殊條件要求。
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PCR實(shí)驗(yàn)過程中易發(fā)生污染
① PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。這也是較常見的污染原因。PCR產(chǎn)物經(jīng)反復(fù)多次的擴(kuò)增,其粘貼量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過PCR的檢測限度,所以即使是很微量的污染也足以造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果假陽性。
② 試劑的污染。在試劑的配制過程中,接觸了污染的容器、移液器、槍頭、溶液等物導(dǎo)致試劑被污染。
③ 待測樣品被污染。放置樣品的容器被污染或由于容器密封不嚴(yán)導(dǎo)致樣品與外界接觸被污染;其次在核酸提取過程中使用了被污染的移液器或槍頭導(dǎo)致樣品被污染;另外,某些樣品中含有病毒,若彌散到空氣中則有可能形成一種交叉污染。
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一般三級(jí)醫(yī)院都擁有標(biāo)準(zhǔn)PCR實(shí)驗(yàn)室與具備核酸檢測的能力。而此次對(duì)二級(jí)醫(yī)院也提出同樣要求,意味著二級(jí)醫(yī)院也需要配備PCR實(shí)驗(yàn)室。標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室一般分為四個(gè)區(qū),一區(qū)為試劑準(zhǔn)備區(qū),二區(qū)為標(biāo)本制備區(qū),三區(qū)為PCR擴(kuò)增區(qū),四區(qū)為產(chǎn)物分析區(qū)。
為避免交叉污染,進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行,即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。各實(shí)驗(yàn)區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進(jìn)行。如今市面上絕大部分新冠病毒檢測試劑盒是在熒光定量PCR平臺(tái)上開發(fā)的,因此沒有產(chǎn)物分析區(qū)也不會(huì)影響新冠病毒的檢測,60-80平米的場地就能滿足要求,但是其他如基于一代測序與基因芯片的檢測項(xiàng)目就無法開展。