動物組織細胞基因組DNA提取

操作步驟

1. 取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉(zhuǎn)入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶K

（500ug/ml）20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉(zhuǎn)入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數(shù)次。于臺式離心機以12000 rpm離心5min，取上清液入另

一離心管中。

2.加2倍體積異，倒轉(zhuǎn)混勻后，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul TE 重新溶解。（可進行PCR反應(yīng)等，需要進一步純化的按下列步驟進行）

3.加等量的酚??振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

4.取上層溶液至另一管，加入等體積的?，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/L氨加入2倍體積的無水乙醇，混勻后室溫沉淀2min ，離心12000 rpm ,10min。

6.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。

7.用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm ， 5min。

8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。

9.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存?zhèn)溆谩?

10.吸取適量樣品于GeneQuant上檢測濃度和純度。

二、大腸菌群檢驗方法:

由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細菌，即:需氧及兼性厭氧、在37°C能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞。因此大腸菌群的檢測一般都是按照它的定義進行。 目前國內(nèi)采用的進出口食品大腸菌群檢測方法主要有國家標準和原國家商檢局制訂的行業(yè)標準。兩個標準方法在檢測程序上略有不同。由于腺病毒的這些特點使其廣泛地應(yīng)用于體外基因轉(zhuǎn)導(dǎo)、體內(nèi)接種yi苗、和基因zhi療等各個領(lǐng)域。

(一)國家標準:國家標準采用三步法，即:乳糖發(fā)酵試驗、分離培養(yǎng)和證實試驗。乳糖發(fā)酵試驗:樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。36士1C培養(yǎng)48土2h，觀察是否產(chǎn)氣。分離培養(yǎng):將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍瓊脂平板上，36士1°C培養(yǎng)18-24h，觀察菌落形態(tài)。證實試驗:挑取平板上的菌落，進行革蘭氏染色觀察。2、細胞轉(zhuǎn)染:取兩個EP管，一個加入Opti-MEM、核心質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒。同時接種乳糖發(fā)酵管36士1°C培養(yǎng)24土2h,觀察產(chǎn)氣情況。

報告:

根據(jù)證實為大腸陽性的管數(shù)，查MPN表，報告每100ml ( g)大腸菌群的MPN值。具體操作參見GB4789. 3-94 《中華人民共和國國家標準食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗大腸菌群測定》

(二)原國家商檢局制訂的行業(yè)標準，等效采用美國FDA的標準方法，用于對出口食品中的大腸進行檢測。本方法采用兩步法：推測試驗:樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種三管LST肉湯。36士1C培養(yǎng)48士2h，觀察是否產(chǎn)氣。證實試驗:將產(chǎn)氣管培養(yǎng)物接種煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯管中，36士1°C培養(yǎng)48士2h，觀察是否產(chǎn)氣。以BGLB產(chǎn)氣為陽性。他們的結(jié)果表明，NimbleGen平臺作為一個使用高密度重疊探針的平臺，盡管覆蓋了較少的基因組區(qū)域，但在靈敏檢測小的變異時所需的測序量也少。查MPN表，報告每ml(g)樣品中大腸菌群的MPN值。具體操作參見SN0169-92《中華人民共和國進出口商品檢驗行業(yè)標準 出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸檢驗方法》

分子生物學(xué)檢測

分子生物學(xué)作為現(xiàn)代生物技術(shù)中zui為先進的實驗手段之一，已經(jīng)廣泛滲透到生命科學(xué)的各個領(lǐng)域，在基礎(chǔ)研究、醫(yī)l療診斷等領(lǐng)域均起到了非常重要的作用。

     借助專業(yè)的技術(shù)優(yōu)勢，英瀚斯生物特配備了高l效的儀器設(shè)備，如SLAN 48P 熒光定量PCR檢測系統(tǒng)、PCR儀、電泳儀、冷凍離心機、高速離心機等。目前公司可為您提供反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR、凝膠電泳遷移率等檢測服務(wù)，大大縮短您的實驗周期、降低您的實驗成本。蛋白質(zhì)定量組學(xué)服務(wù)細胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動態(tài)變化對不同生命過程有重要影響。

RNA pull down 檢測

RNA   pull down：RNA沉淀檢測，是檢測RNA結(jié)合蛋白與其靶RNA之間相互作用的主要實驗方法之一。使用體外轉(zhuǎn)錄將RNA進行生物素標記，并與細胞蛋白裂解液孵育，形成RNA-蛋白復(fù)合物。高l效毛細管電泳法(High-performanceCapillaryElectrophoresis,HPCE)這是一-種利用窄孔熔融石英毛細管來從復(fù)合物中分離不同化學(xué)組分的技術(shù)。復(fù)合物通過磁珠結(jié)合后分離，復(fù)合物純化洗脫后通過Western blot驗證檢測特性的蛋白。若篩選可能結(jié)合的蛋白通過質(zhì)譜實驗進行檢測篩選。