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在前PCR區(qū)建立PCR混合物：

⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃，在實(shí)驗(yàn)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。

⑵如果你的實(shí)驗(yàn)室使用多套引物，以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì)，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。

⑶作為一個(gè)規(guī)則，應(yīng)該保存一套陰性、弱陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照樣品來(lái)分析樣品配制和PCR前過(guò)程的效率和潔凈程度。而且，你也希望通過(guò)使用一個(gè)已知的弱陽(yáng)性樣品來(lái)驗(yàn)證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。

⑷陰性樣品要與每組樣品同時(shí)做，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染，陰性對(duì)照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。

⑸當(dāng)做陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，有兩個(gè)理由決定了應(yīng)該使用很少數(shù)量的核酸。

⑹由于必須有對(duì)照反應(yīng)，對(duì)照模板的特點(diǎn)應(yīng)該予以考慮。

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凈化無(wú)菌車間操作區(qū)的圍護(hù)結(jié)構(gòu)應(yīng)使用氣體滅菌處理，亦即使用甲醛或熏蒸消毒滅菌。PCR實(shí)驗(yàn)室凈化廠家建議大家，每周進(jìn)行一次氣體消毒處理，每次一般清潔或維護(hù)一段時(shí)間后，懷疑該區(qū)域可能發(fā)生污染時(shí)，用上述氣體進(jìn)行熏蒸處理。進(jìn)行的氣體滅菌時(shí)，操作人員一定要采取安全措施，注意人身安全。

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