動(dòng)物組織細(xì)胞基因組DNA提取

操作步驟

1. 取新鮮或冰凍動(dòng)物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細(xì)胞裂解緩沖液勻漿至不見(jiàn)組織塊，轉(zhuǎn)入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶K

（500ug/ml）20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉(zhuǎn)入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數(shù)次。于臺(tái)式離心機(jī)以12000 rpm離心5min，取上清液入另

一離心管中。

2.加2倍體積異，倒轉(zhuǎn)混勻后，可以看見(jiàn)絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul TE 重新溶解。（可進(jìn)行PCR反應(yīng)等，需要進(jìn)一步純化的按下列步驟進(jìn)行）

3.加等量的酚??振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

4.取上層溶液至另一管，加入等體積的?，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/L氨加入2倍體積的無(wú)水乙醇，混勻后室溫沉淀2min ，離心12000 rpm ,10min。

6.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。

7.用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm ， 5min。

8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。

9.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存?zhèn)溆谩?

10.吸取適量樣品于GeneQuant上檢測(cè)濃度和純度。

線粒體測(cè)序

線粒體是真核生物的重要細(xì)胞器，是生物體的能量工廠，參與能量代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡等許多生命活動(dòng)，對(duì)生物的生理活動(dòng)起著至關(guān)重要的作用。大部分線粒體基因由于其母系遺傳特性以及進(jìn)化速率較快等特點(diǎn)，被廣泛地用于種群遺傳學(xué)、進(jìn)化生物學(xué)、譜系地理學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育學(xué)、疾病診斷等學(xué)科領(lǐng)域。蛋白質(zhì)互作驗(yàn)證服務(wù)在后基因組時(shí)代，基因的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)作為生物功能直接的執(zhí)行者和體現(xiàn)者，在生物集體的生理及病理中扮演著重要的角色。線粒體全基因組在生物進(jìn)化的研究中具有的優(yōu)勢(shì)。由于線粒體有著與真核生物長(zhǎng)期共生的進(jìn)化歷史，因此其基因組包含了反映物種進(jìn)化的關(guān)鍵信息，同時(shí)，相對(duì)于核基因組，線粒體基因組小，容易對(duì)大量物種進(jìn)行橫向的比較分析，有利于生物進(jìn)化的研究，因而受到進(jìn)化生物學(xué)家的鐘愛(ài)。線粒體的組成可以從兩個(gè)層面上反映物種及群體的遺傳和進(jìn)化，即核酸序列組成和基因組的結(jié)構(gòu)特征，兩者的特征具有不同的進(jìn)化機(jī)制和進(jìn)化速度，在進(jìn)化生物學(xué)研究中可以很好的互補(bǔ)。

RNA pull down 檢測(cè)

RNA   pull down：RNA沉淀檢測(cè)，是檢測(cè)RNA結(jié)合蛋白與其靶RNA之間相互作用的主要實(shí)驗(yàn)方法之一。使用體外轉(zhuǎn)錄將RNA進(jìn)行生物素標(biāo)記，并與細(xì)胞蛋白裂解液孵育，形成RNA-蛋白復(fù)合物。目前公司可為您提供反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR、凝膠電泳遷移率等檢測(cè)服務(wù)，大大縮短您的實(shí)驗(yàn)周期、降低您的實(shí)驗(yàn)成本。復(fù)合物通過(guò)磁珠結(jié)合后分離，復(fù)合物純化洗脫后通過(guò)Western blot驗(yàn)證檢測(cè)特性的蛋白。若篩選可能結(jié)合的蛋白通過(guò)質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)篩選。

單細(xì)胞測(cè)序（英語(yǔ)：Single cell sequencing）采取優(yōu)化的下一代DNA測(cè)序技術(shù)（NGS）檢測(cè)單細(xì)胞的序列，可以獲得特定微環(huán)境下的細(xì)胞序列差異以方便研究其功能差異等。對(duì)個(gè)體細(xì)胞的DNA測(cè)序可以幫助我們了解例如在中的小范圍細(xì)胞的變異；對(duì)其進(jìn)行RNA測(cè)序可以幫助我們了解和鑒別不同的細(xì)胞類型與其表現(xiàn)的基因，對(duì)研究發(fā)育生物學(xué)等有較大裨益。通過(guò)識(shí)別個(gè)體基因組在特定位點(diǎn)的特定序列重復(fù)，即可創(chuàng)建其基因檔案。

分離單細(xì)胞

在全基因組擴(kuò)增和測(cè)序前，有很多方法可以分離細(xì)胞個(gè)體，其中流式細(xì)胞術(shù)（FACS）較為常用。個(gè)體細(xì)胞可以用顯微操作來(lái)收集，這樣較為快捷而且成本較低，但是比較有技術(shù)難度，而且顯微鏡下對(duì)細(xì)胞的錯(cuò)誤分類容易影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。激光捕獲顯微切割技術(shù)（LCM）亦可以用來(lái)收集單細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)流程：細(xì)胞固定-細(xì)胞膜破膜-蛋白封閉-目的蛋白結(jié)合-熒光二抗結(jié)合-DAPI染色-熒光顯微鏡拍照或激光共聚焦顯微鏡拍照。但是盡管激光捕獲顯微切割可以保留樣本細(xì)胞在組織中的空間位置，但是捕獲單細(xì)胞的時(shí)候容易連帶周圍細(xì)胞的物質(zhì)。高通量的細(xì)胞個(gè)體分離還可以使用微流控技術(shù)。微流控技術(shù)和流式細(xì)胞技術(shù)都能準(zhǔn)確而自動(dòng)地分離無(wú)偏樣本。但是，兩種方法都要求首先將細(xì)胞從其為環(huán)境中脫離，因此可能在RNA表達(dá)分析中造成對(duì)轉(zhuǎn)錄數(shù)據(jù)的干擾。