抑菌效力

接種大腸埃希菌、金黃色球菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)；接種白色的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，20～25℃培養(yǎng)24～48小時(shí)。上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為50～100cfu的菌懸液。30-2010食品安全標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)GB4789。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基中，20～25℃培養(yǎng)5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜方法吸出孢子懸液至無菌氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)50～100cfu的孢子懸液。

微生物限度檢查

2.接種和稀釋

   按下列要求進(jìn)行供試液的接種和稀釋，制備微生物回收試驗(yàn)用供試液。所加菌液的體積應(yīng)不超過供試液體積的1%。為確認(rèn)供試品中的微生物能被充分檢出，首先應(yīng)選擇zui低稀釋級的供試液進(jìn)行計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)。

   （1）試驗(yàn)組 取上述制備好的供試液，加入試驗(yàn)菌液，混勻，使每1ml供試液或每張濾膜所濾過的供試液中含菌量不大于100cfu。

   （2）供試品對照組 取制備好的供試液，以稀釋液代替菌液同試驗(yàn)組操作。

   （3）菌液對照組取 不含中和劑及滅活劑的相應(yīng)稀釋液替代供試液，按試驗(yàn)組操作加入試驗(yàn)菌液并進(jìn)行微生物回收試驗(yàn)。

   若因供試品抗jun活性或溶解性較差的原因?qū)е聼o法選擇zui低稀釋級的供試液進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)采用適宜的方法對供試液進(jìn)行進(jìn)一步的處理?！称肺⑸镯?xiàng)目背景——食源病原微生物引起的食源性疾病是食品安全的核心問題。如果供試品對微生物生長的抑制作用無法以其他方法消除，供試液可經(jīng)過中和、稀釋或薄膜過濾處理后再加入試驗(yàn)菌懸液進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。

計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)中，采用平皿法或薄膜過濾法時(shí)，試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對照組菌落數(shù)的值與菌液對照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)；采用MPN法時(shí)，試驗(yàn)組菌數(shù)應(yīng)在菌液對照組菌數(shù)的95%置信限內(nèi)。食源病原微生物可通過接觸物表面、水、土壤、空氣、排泄物、食物等媒介傳播，從而污染“從農(nóng)田到餐桌”的食物鏈任何環(huán)節(jié)。若各試驗(yàn)菌的回收試驗(yàn)均符合要求，照所用的供試液制備方法及計(jì)數(shù)方法進(jìn)行該供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)。

   方法適用性確認(rèn)時(shí)，若采用上述方法還存在一株或多株試驗(yàn)菌的回收達(dá)不到要求，那么選擇回收接近要求的方法和試驗(yàn)條件進(jìn)行供試品的檢查。

   供試品檢查

   檢驗(yàn)量

   檢驗(yàn)量即一次試驗(yàn)所用的供試品量（g、ml或c㎡）。

   一般應(yīng)隨機(jī)抽取不少于2個(gè)zui小包裝的供試品，混合，取規(guī)定量供試品進(jìn)行檢驗(yàn)。

   除另有規(guī)定外，一般供試品的檢驗(yàn)量為10g或10ml；膜劑為100c㎡；貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗(yàn)量可以酌減。檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)從2個(gè)以上zui小包裝單位中抽取供試品，大蜜丸還不得少于4丸，膜劑還不得少于4片。

   供試品的檢查

   按計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的計(jì)數(shù)方法進(jìn)行供試品中需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的測定。

   胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于測定需氧菌總數(shù)；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于測定霉菌和酵母菌總數(shù)。

   陰性對照試驗(yàn) 以稀釋液代替供試液進(jìn)行陰性對照試驗(yàn)，陰性對照試驗(yàn)應(yīng)無菌生長，如果陰性對照有菌生長，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)査。