蛋白結晶板發(fā)展

獲得晶體及提高晶體質量是蛋白質結晶方法學中的兩大基本問題.為解決這兩個問題,結構生物學家已發(fā)展了許多方法,其中針對蛋白質本身進行分子改造是非常重要的方法之一.通過蛋白質工程技術,如突變,還原化修飾,剪切或刪除構象柔性環(huán)區(qū),融合蛋白,復合物共結晶,原位蛋白質水解等方法對蛋白質本身進行分子改造,可明顯提高其結晶成功率及晶體質量.隨著該方面成功案例的不斷積累,分子改造技術越來越凸顯出其在蛋白質結構解析中的重要作用,特別是對一些難以結晶或提高晶體質量的蛋白質而言,其應用價值更不可忽視.針對近年來分子改造技術在蛋白質結晶中的應用進行了回顧與總結,并展望了其未來的發(fā)展。

蛋白質晶體板相互作用

蛋白質分子的結構層次蛋白中的多肽鏈往往不是一個如圖4圖4所示完全伸展的鏈。L.C.鮑林和R.B.科里曾由氨基酸、小肽和有關化合物晶體結構的測定中歸納了肽鍵的鍵長、鍵角等。鏈中肽鍵N-C的鍵長為1.32埃，具有40%的雙鍵成分，與周圍四個鍵是共面的，且N-H和C=O具有反式構型。肽鍵因具雙鍵成分而無旋轉的自由，但它周圍的每個Cα原子與相鄰兩個肽鍵中的氮和碳原子所形成的Cα-N和Cα-C單鍵都具有較大的回旋余地，從而一個多肽鍵可能存在于不計其數(shù)的構象或立體結構中，其中有些構象使未成鍵原子間形成較多較強的氫鍵并產生其他能使整個分子趨于穩(wěn)定的相互作用。

蛋白結晶板使用

蛋白質是水產品的主要組分,其含量測定在水產品加工及研究等方面應用極為廣泛.目前,各蛋白含量快速測定方法通常是在試管中進行反應并應用分光光度計測定,其操作過程較繁瑣,分析大批量樣品時效率低,上述缺點在高通量篩選、檢測等場合尤為突出.為了克服該不足,實現(xiàn)蛋白含量的快速高通量測定,本研究基于Folin-酚法,利用96孔板作為反應器并配合比色,建立了一種蛋白含量測定的微孔板方法并評價其合理性.該法測得樣品的蛋白含量與常規(guī)法結果無顯著性差異,反應在30-90 min顯色穩(wěn)定,標準曲線的線性相關系數(shù)R2=0.9922,標準偏差范圍為0.07%-0.78%,檢測限為10 μg.與常規(guī)法相比,微孔板法保持了Folin-酚法的準確性及穩(wěn)定性,同時具有通量高、節(jié)省樣品、試劑及測定時間等優(yōu)點,在蛋白高通量快速測定方面更具優(yōu)勢。