軟gu細(xì)胞培養(yǎng)

(1)豚鼠脫頸處死，備皮，用75%酒精消毒背部及四肢皮膚。

(2)無(wú)菌操作下取下雙側(cè)股骨頭及膝關(guān)節(jié)(保留周圍肌肉，軟gu不能暴露)，75%酒精浸泡5分鐘，轉(zhuǎn)移至PBS緩沖液中，帶入超凈工作臺(tái)，剔除關(guān)節(jié)周圍附著的軟組織，打開(kāi)髖、膝關(guān)節(jié)，用尖刀削取關(guān)節(jié)軟gu組織，置入裝有PBS緩沖液的無(wú)菌培養(yǎng)皿，防止軟gu組織被風(fēng)干。因此利用多種精密儀器，結(jié)合特異性的檢測(cè)試劑，對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞直接檢測(cè)其增殖的基本過(guò)程，或?qū)?xì)胞進(jìn)行不同的處理后檢測(cè)細(xì)胞生活周期內(nèi)各項(xiàng)指標(biāo)的變化，從而深入揭示細(xì)胞新陳代謝的具體機(jī)制。

(3)PBS緩沖液充分漂洗軟gu小塊3次，然后用小剪刀將軟gu塊切碎至約Imm3大小。

(4)再次用PBS緩沖液沖洗3次，濾干，將細(xì)小的軟gu塊置入放有0.2%的II型膠原酶3ml的廣口瓶里，搖勻后置于37°C恒溫震蕩箱中消化，40分鐘后將上層消化液轉(zhuǎn)移至15ml規(guī)格離心管中，800r/min離心5min,收集細(xì)胞(沉淀物),加入含10%的胎牛xue清DMEM培養(yǎng)液4ml并吹打混勻，制成軟gu細(xì)胞混懸液。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)介紹——細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力檢測(cè)：細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是體外模擬細(xì)胞遷移能力和修復(fù)能力快捷的檢測(cè)方法。

(5)把消化所得的軟gu細(xì)胞混懸液收集于離心管中，經(jīng)濾網(wǎng)過(guò)濾后用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),并把細(xì)胞混懸液密度調(diào)整為2x105/ml接種于25cm2規(guī)格的培養(yǎng)瓶中。將培養(yǎng)瓶放置于CO2培養(yǎng)箱內(nèi)。培養(yǎng)條件為37°C、5%CO2。

(6)未消化完的軟gu小塊繼續(xù)用II型膠原酶如_上法消化，直至軟gu塊基本消失。

(7)每日在倒置顯微鏡下觀察軟gu細(xì)胞生長(zhǎng)情況并拍照保存。

細(xì)胞分化

細(xì)胞分化是指同一來(lái)源的細(xì)胞逐漸產(chǎn)生出形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征各不相同的細(xì)胞類群的過(guò)程，其結(jié)果是在空間上細(xì)胞產(chǎn)生差異，在時(shí)間上同一細(xì)胞與其從前的狀態(tài)有所不同。細(xì)胞分化的本質(zhì)是基因組在時(shí)間和空間上的選擇性表達(dá)，通過(guò)不同基因表達(dá)的開(kāi)啟或關(guān)閉，終產(chǎn)生標(biāo)志性蛋白質(zhì)。細(xì)胞誘導(dǎo)是指將一群不同類型或者形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征存在差異的細(xì)胞通過(guò)生物學(xué)、物理學(xué)等手段，將之轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂邢嗨?相同形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征的細(xì)胞群體的過(guò)程。因此,3D多細(xì)胞腫liu球培養(yǎng)模型已經(jīng)逐漸應(yīng)用于gan細(xì)胞培養(yǎng)和分化、ai癥研究、yao物和毒性篩選及組織工程等特定應(yīng)用中。

雜交瘤細(xì)胞基因測(cè)序

雜交瘤細(xì)胞有丟失高特異性高活性的風(fēng)險(xiǎn)，或者細(xì)胞狀態(tài)不好乃至。(3)PBS緩沖液充分漂洗軟gu小塊3次，然后用小剪刀將軟gu塊切碎至約Imm3大小。而經(jīng)過(guò)雜交瘤測(cè)序，可以獲得相應(yīng)的序列，可以以重組蛋白的方式來(lái)穩(wěn)定獲得；從而使得研發(fā)或生產(chǎn)者不必以雜交瘤細(xì)胞為載體保留該，而可以以堿基序列的形式進(jìn)行保存和傳播交流、鑒定。同時(shí)還可以使用獲得的測(cè)序結(jié)果進(jìn)行等知識(shí)產(chǎn)權(quán)方面的申請(qǐng)審批。有時(shí)為了進(jìn)一步大規(guī)模生產(chǎn)或進(jìn)行人源化等生物工程操作/修飾，有必要了解雜交瘤所表達(dá)的對(duì)應(yīng)的基因序列以進(jìn)一步進(jìn)行生物工程操作與生產(chǎn)。

相較于直接對(duì)進(jìn)行基于蛋白質(zhì)分析的測(cè)序相比，得益于基因測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，雜交瘤測(cè)序可以提供的結(jié)果，防止蛋白測(cè)序中如亮氨酸/異亮氨酸較難區(qū)分等潛在風(fēng)險(xiǎn)。

關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)的常見(jiàn)問(wèn)題

Q：培養(yǎng)液到底要不要加雙抗（青&鏈）？

A：雙抗不是細(xì)胞生長(zhǎng)必需的。我們培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)不常規(guī)使用，因?yàn)檫B續(xù)使用會(huì)促進(jìn)耐藥性細(xì)胞株的產(chǎn)生，導(dǎo)致輕度污染持續(xù)存在。一旦將從培養(yǎng)液中去除，這種輕度污染終將發(fā)展成為大規(guī)模污染。具體情況，可根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境，自行決定是否使用雙抗。

Q：細(xì)胞培養(yǎng)，能更換成其它種類的培養(yǎng)基嗎？

A：我們強(qiáng)烈建議好使用細(xì)胞提供機(jī)構(gòu)或細(xì)胞庫(kù)推薦的生長(zhǎng)培養(yǎng)液。有些細(xì)胞可能會(huì)適應(yīng)在不同培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，在做好保種的條件下，可以分出部分細(xì)胞做測(cè)試。