色譜分析法、層析法，是一種分離和分析方法，現(xiàn)代生物企業(yè)生產(chǎn)過程中的核心技術(shù)之一。在分析化學(xué)、有機化學(xué)、生物化學(xué)等領(lǐng)域有著非常廣泛的應(yīng)用。使用三乙胺作為封尾劑，與硅羥基吸附，可以使峰型改善，這個三乙胺曾經(jīng)一度成為分析界的寶貝和。色譜法利用不同物質(zhì)在不同相態(tài)的選擇性分配，以流動相對固定相中的混合物進行洗脫，混合物中不同的物質(zhì)會以不同的速度沿固定相移動，終達到分離的效果。色譜理論：保留時間保留時間是樣品從進入色譜柱到流出色譜柱所需要的時間，不同的物質(zhì)在不同的色譜柱上以不同的流動相洗脫會有不同的保留時間，因此保留時間是色譜分析法比較重要的參數(shù)之一。保留時間由物質(zhì)在色譜中的分配系數(shù)決定：tR = t0(1 KVs / Vm)式中tR表示某物質(zhì)的保留時間，t0是色譜系統(tǒng)的死時間，即流動相進入色譜柱到流出色譜柱的時間，這個時間由色譜柱的孔隙、流動相的流速等因素決定。K為分配系數(shù)，VsVm表示固定相和流動相的體積。這個公式又叫做色譜過程方程，是色譜學(xué)基本的公式之一。

制備型加壓液相色譜，按照色譜柱和樣品量的大小，分為：（1）低壓液相色譜；（2）中壓液相色譜；（3）高壓液相色譜；（4）快速色譜。低壓、中壓與高壓液相色譜的壓力范圍之間會存在一定交疊，沒有統(tǒng)一、明確的標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)柱子分離過含有高水分樣品后，需要將色譜柱重新老化，以除去固定相中吸附的水分。 快速色譜柱壓通常為2bar（或30psi）左右，對于那些容易分離的簡單混合物，由于快速色譜具有操作簡便、經(jīng)濟等優(yōu)點，常常是實驗室的佳選。但快速色譜不同于一般的層析分離，這種分離沒有壓力，而快速分離通常使用瓶裝氮氣加壓，使流動相具有一定的流速，從而縮短了分離時間。 快速色譜使用的柱子一般是玻璃柱，柱直徑為3～10cm．長度為7～15cm?？焖偕V中使用廣泛的固定相為硅膠。采用的粒徑通常為：25～40μm，40～63μm或63～200μm的球形固定相。其它如鍵合相、氧化鋁、聚酰胺吸附劑也常用作快速色譜的固定相使用。

液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相，稱為經(jīng)典液相色譜法，此方法柱效低、時間長(常有幾個小時)。(3)固定相的選擇硅膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。液相色譜法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。也稱現(xiàn)代液相色譜。

HPLC的特點和優(yōu)點

HPLC有以下特點：

高壓—壓力可達150~300Kg/cm2。色譜柱每米為75 Kg/cm2以上。

高速—流速為0.1~10.0 ml/min。

—可達5000塔板每米。在一根柱中同時分離成份可達100種。

高靈敏度—紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。