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發(fā)布時(shí)間:2021-03-08 08:53  
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亞細(xì)胞定位技術(shù)服務(wù)客戶提供:
1、基因序列由我們來(lái)全基因合成。
2、載體,我們擴(kuò)菌后再PCR構(gòu)建表達(dá)載體。
3、表達(dá)載體,我們轉(zhuǎn)化農(nóng)注射、轉(zhuǎn)染擬南芥、原生質(zhì)體。
真核細(xì)胞有許多獨(dú)立功能的膜結(jié)構(gòu)組件,蛋白質(zhì)活性和亞細(xì)胞定位的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)是許多細(xì)胞過(guò)程的需要。光具有高空間及時(shí)間分辨率,被廣泛用于外部觸發(fā)生物調(diào)節(jié)。蛋白質(zhì)可通過(guò)融合感光體獲得光敏方向性,但這種耗時(shí)、復(fù)雜的基因編輯過(guò)程可能會(huì)擾亂正常細(xì)胞通路,改變蛋白功能和行為。因此需要更小影響蛋白質(zhì)功能的策略實(shí)現(xiàn)蛋白的準(zhǔn)確控制。適配體具有優(yōu)異的分子識(shí)別能力,并且方便修飾,設(shè)計(jì)靈活。使用基于的熒光顯微分析技術(shù),替代傳統(tǒng)的質(zhì)譜繪圖技術(shù),研究人員使用13993種,定位了細(xì)胞間隔和亞結(jié)構(gòu)內(nèi)的12003種蛋白質(zhì),共計(jì)完成了13個(gè)主要細(xì)胞器的蛋白質(zhì)組學(xué)研究。本文中作者發(fā)展了基于適配體的光響應(yīng)納米平臺(tái),并選擇轉(zhuǎn)錄因子RelA作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,一種適配體Apt可高結(jié)合活性、特異性識(shí)別RelA。
亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)本質(zhì)上,既然是熒光雙染技術(shù),蛋白質(zhì)本身沒有熒光,有多種辦法使它帶上熒光信號(hào),一是GFP(綠色熒光蛋白)融合標(biāo)記,二是免1疫熒光標(biāo)記,通過(guò)帶有熒光的抗1體直接或者間接識(shí)別蛋白。標(biāo)記完成后在激光共聚焦顯微鏡下觀察熒光信號(hào)的疊加情況,如果能與細(xì)胞器等Marker蛋白信號(hào)重疊則可說(shuō)明目的蛋白定位情況。很多情況下用GFP(綠色熒光蛋白)融合標(biāo)記目的蛋白,用熒光抗1體標(biāo)記細(xì)胞器。2.關(guān)鍵酶糖酵解途徑中大多數(shù)反應(yīng)是可逆的,但有3個(gè)反應(yīng)基本上不可逆,分別由己糖激酶(或葡萄糖激酶),6-磷酸果糖激酶-1和酸激酶催化,是糖酵解途徑流量的3個(gè)調(diào)節(jié)點(diǎn),所以被稱為關(guān)鍵酶。