低溫生物菌種的原理

菌種保藏有多種方法，其原理大多大同小異，主要是運(yùn)用一些方式盡量降低生物體內(nèi)的代謝，達(dá)到延長(zhǎng)生命，減少變異的目的。通常采用的方法為低溫、缺氧、干燥。

低溫主要對(duì)菌種產(chǎn)生兩方面的影響，首先，較低的溫度可以減緩機(jī)體細(xì)胞的酶活，降低新陳代謝，達(dá)到保藏菌種的目的。其次，低溫同時(shí)會(huì)導(dǎo)致菌體誘發(fā)菌絲自溶機(jī)制，如果降溫過(guò)程失誤，同樣會(huì)造成機(jī)體的機(jī)械損傷和溶質(zhì)損傷。

微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過(guò)程中，必須使微生物的代謝處于不活躍或相對(duì)靜止的狀態(tài)，才能在一定的時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。

低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，所以，菌種保藏方法雖多，但都是根據(jù)這三個(gè)因素而設(shè)計(jì)的。

                                                            低溫生物菌種的脫水存法

③ 石蠟油封存法，在斜面菌種培養(yǎng)物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。

                                                      低溫生物菌種的技術(shù)規(guī)程

1、安瓿管或凍存管的準(zhǔn)備

預(yù)凍時(shí)一般冷凍速度控制在以每分鐘下降1℃為好、使樣品凍結(jié)到-35℃。

低溫生物菌種的孢子分離法

( 1 )褶上涂抹法:選取新鮮、健壯、未開(kāi)傘、的子實(shí)體，洗凈后用0 75 %酒精表面滅菌2 分鐘，然后連同培養(yǎng)基一起放入接種箱內(nèi)，經(jīng)馬林熏蒸消毒12 ~ 24 小時(shí)，再按無(wú)菌操作技術(shù)將接種環(huán)在子實(shí)體菌褶上涂抹，把涂抹后帶孢子的接種環(huán)在培養(yǎng)基上劃線接種，，然后置于25 ~ 28 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，可得純菌種。

( 2 )孢子印采集法:取滅過(guò)菌的載玻片、試紙或黑布，置于新鮮、未開(kāi)傘或未開(kāi)裂的子體菌褶的下方。經(jīng)24 小時(shí)后，便落下孢子，形成印痕(即孢子印)。然后，用接種環(huán)或玻璃棒蘸取孢子，接種在平面或斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，可得純菌種。

( 3 )孢子收集器采集法:孢子收集器由玻璃鐘罩、培養(yǎng)皿、三角架、搪瓷盤(pán)等組成。鐘罩下為一搪瓷盤(pán)，直徑25 厘米左右，盤(pán)內(nèi)先墊襯4~6 層紗布，中央放1 副9 厘米直徑的培養(yǎng)皿，大蓋口朝下，上放小的，口向上。然后，在上面小的培養(yǎng)皿上放1 只鉛絲繞成的三角架，再將帶孔的玻璃鐘罩蓋上，頂上罩孔用棉塞塞好，用紗布包好整個(gè)孢子收集器，置于高壓滅菌鍋或蒸籠內(nèi)滅菌2小時(shí)。