ELISA定性測定

定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或antibody作出'有'或'無'的簡單回答，分別用'陽性'、'陰性'表示。'陽性'表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng)。'陰性'則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度，其實質(zhì)仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗，呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性、弱陽性更具定量意義。

在間接法和夾心法ELISA中，陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA中則相反，陰性孔呈色深于陽性孔。

總RNA的抽提方法:

目前常用的方法是用異硫qing酸胍苯1酚抽提法。

提取步驟:

先用液氮研磨材料，勻漿，加入Trizol試劑，進(jìn)一步破碎細(xì)胞并溶解細(xì)胞成分。然后加入氯1仿抽提，離心，分離水相和有機(jī)相，收集含有RNA的水相，通過異丙1醇沉淀，獲得比較純的總RNA,用于下一步mRNA的純化。也可將含有RNA樣品的細(xì)胞破碎液通過硅膠膜純化柱純化。

RNA濃度和純度判斷:

OD260為1時相當(dāng)于濃度為50 ug/mL;

OD260/0D280值在1.8~ 2.0之間，表示純度較好;

0D260/OD280值低于1.8，樣品有蛋白質(zhì)或酚污染;

0D260/0D280值大于2.0，提取的RNA可能有降解;

電泳后如果rRNA大小完整，而且28S rRNA和18SrRNA亮度接近2:1、mRNA分布均勻，則認(rèn)為RNA。

酵母基因組DNA提取好方法

DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法?；瘜W(xué)方式如異硫CN酸胍法、堿裂解法。生物方式：酶法。根據(jù)核酸分離純化方式的不同有；硅質(zhì)材料、陰離子交換樹脂等。

提取基因組DNA和細(xì)胞核DNA是不同的方法

提取細(xì)胞核要先把細(xì)胞破碎分離出細(xì)胞核,要在甘油或其他保護(hù)劑中進(jìn)行

SDS十二烷基磺酸鈉：可破壞細(xì)胞膜、核膜,并使組織蛋白與DNA分離

CATB是一種抽提液,破壞細(xì)胞膜的~

DNA不溶于異丙1醇,異丙1醇可以析出DNA,產(chǎn)生白色絮狀沉淀,用槍頭挑出就可以了

病毒核酸提取就像'針尖上跳舞'

檢驗的首要一步是病毒核酸提取，這也是zui危險的一步，需要在專門的生物安全二級實驗室里進(jìn)行。檢測人員要在清潔區(qū)穿戴兩套防護(hù)服、兩副乳膠手套，戴護(hù)目鏡，穿靴套，前后穿過6道門，才能到達(dá)核心實驗區(qū)，病毒核酸提取就像是“針尖上的舞蹈”?！懊看蚊撓路雷o(hù)服，衣服都濕透了。在2—4個小時的病毒核酸提取實驗過程中，一般都會安排兩人一組進(jìn)行檢驗，既是規(guī)定要求，也是防止工作人員在密閉的負(fù)壓實驗空間里出現(xiàn)意外。