基因的分子手術(shù)是相當(dāng)復(fù)雜的過(guò)程，其中zui重要的是連接酶

互補(bǔ)堿基之間的配對(duì)，形成雙鏈。并在DNA連接酶的作用下，使同一DNA分子的兩端連接成環(huán)狀，或使兩個(gè)分子連成一大的線(xiàn)狀分子。不同限制性?xún)?nèi)切酶切割DNA產(chǎn)生的三種不同類(lèi)型的末端。

基因的分子手術(shù)是相當(dāng)復(fù)雜的過(guò)程，除了需要限制性?xún)?nèi)切酶外，還需要其他- -些工具酶包括連接酶、DNA 聚合酶、RNA聚合酶、核酸酶、末端修飾酶等，對(duì)DNA或RNA進(jìn)行各種各樣的修飾。其中zui重要的是連接酶。

堿性磷酸酶

人體在懷孕，以及骨骼成長(zhǎng)中遭受某種類(lèi)型損傷后會(huì)將堿性磷酸酶釋放進(jìn)血流。堿性磷酸酶是一種由肝1臟產(chǎn)生的蛋白質(zhì)并可以在所有人體器1官中發(fā)現(xiàn)它。在兒童和青少年的骨骼成長(zhǎng)過(guò)程中，骨頭中的磷酸酶數(shù)量相對(duì)較高。醫(yī)生能通過(guò)血檢了解堿性磷酸酶，如果水平過(guò)高就說(shuō)明存在一些健康問(wèn)題。然而，堿性磷酸酶只是幫助醫(yī)生找出潛在原因的其中一個(gè)指數(shù)。

cDNA是指具有與某RNA鏈呈互補(bǔ)堿基序列的DNA。與RNA鏈互補(bǔ)的單鏈DNA，以其RNA為模板，在適當(dāng)引物的存在下，由依賴(lài)RNA的DNA聚合酶（反轉(zhuǎn)錄酶）作用而合成，并且在合成單鏈cDNA后，再用堿處理除去與其對(duì)應(yīng)的RNA以后，以單鏈cDNA為模板，由依賴(lài)DNA的DNA聚合酶或依賴(lài)RNA的DNA聚合酶作用合成雙鏈cDNA。在這種情況下，mRNA的cDNA，與原來(lái)的基因組DNA相同而且無(wú)內(nèi)含子；相反地，對(duì)應(yīng)于在原來(lái)基因中沒(méi)有的而在mRNA存在的3'末端的poly A序列等的核苷序列上，與外顯子序列、先導(dǎo)序列以及后續(xù)序列等一起反映出mRNA結(jié)構(gòu)。
置換合成法。該方法利用鏈在反轉(zhuǎn)錄酶作用下產(chǎn)生的DNA RNA雜交鏈不用堿變性，而是在dNTP存在下。利用RNA酶H在雜交鏈的mRNA鏈上造成切口和缺口。從而產(chǎn)生一系列RNA引物，使之成為合成第二鏈的引物。在大腸DNA聚合酶工的作用下合成第二鏈。該反應(yīng)有3個(gè)主要優(yōu)點(diǎn)：①非常有效；②直接利用鏈反應(yīng)產(chǎn)物，無(wú)須進(jìn)一步處理和純化；③不必使用S1核酸酶來(lái)切割雙鏈cDNA中的單鏈發(fā)夾環(huán)。