等溫核酸試劑盒

據(jù)介紹，RPA檢測的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂?尤其是DNA)模板擴增到可以檢出的水平，從單個模板分子得到大約1012擴增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理，適用于無法提取核酸的實地檢測。RPA不僅可以對擴增產(chǎn)物進行終點檢測，還可以對擴增過程進行實時監(jiān)控，甚至可以通過試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。

目前，TwistAmp? 試劑盒的擴增子長度在500bp以內(nèi)。不過，經(jīng)過特別優(yōu)化的RPA擴增，也可以生成更長的擴增產(chǎn)物，或者減慢擴增速度(便于定量)，甚至在更低的溫度下進行反應(yīng)。

FAQ

1 RPA能實現(xiàn)多重化嗎?

可以。RPA技術(shù)支持在同一個管中同時進行多個擴增反應(yīng)。不過，多重化的引物組合需要精心設(shè)計，以便每個引物都能同樣有效的工作。需要注意的是，RPA反應(yīng)的引物總量(nmol)不要超標(biāo)太多。如果在一個反應(yīng)中使用兩個以上的擴增引物，就應(yīng)該控制不同引物的量。另外，我們應(yīng)當(dāng)事先考慮好檢測多個擴增事件的探針、設(shè)備以及熒光團的兼容性。

能否對模板進行定量?

可以。擴增子達到可檢出水平的時間，依賴于反應(yīng)起始時的模板量。初始模板的拷貝越多，擴增子就越快達到可檢出水平。不過，這種定量需要精心的實驗安排，確保對照反應(yīng)是同時開始的。舉例來說，可以利用鎂離子的添加時間進行控制。因為鎂離子一旦進入體系，RPA反應(yīng)就會開始。

此外，較慢的擴增過程有助于的定量。我們可以通過調(diào)整反應(yīng)條件或引物設(shè)計來減慢RPA的反應(yīng)速度。

試劑盒

英國TwistDx Inc公司開發(fā)的重組酶聚合酶擴增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)--被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)，目前新的等溫擴增檢測技術(shù)。以此為基礎(chǔ)的TwistAmp? 核酸擴增產(chǎn)品，能夠在15分鐘內(nèi)進行常溫下的單分子核酸檢測。該技術(shù)對硬件設(shè)備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物防御和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。常規(guī)PCR必須經(jīng)過變性、退火、延伸三個步驟，而PCR儀本質(zhì)上就是一個控制溫度升降的設(shè)備。RPA反應(yīng)的適宜溫度在37°C - 42°C之間，無需變性，在常溫下即可進行。這無疑能大大加快PCR的速度。此外，由于不需要溫控設(shè)備，RPA可以真正實現(xiàn)便攜式的快速核酸檢測。據(jù)介紹，RPA檢測的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂?尤其是DNA)模板擴增到可以檢出的水平，從單個模板分子得到大約1012擴增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理，適用于無法提取核酸的實地檢測。RPA不僅可以對擴增產(chǎn)物進行終點檢測，還可以對擴增過程進行實時監(jiān)控，甚至可以通過試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。