熒光分光光度計(jì)測(cè)試注意事項(xiàng)

①樣品應(yīng)盛在四面透光的石英比色皿（熒光池）中，如果是揮發(fā)性樣品應(yīng)使用帶塞的熒光池。

②在熒光分析時(shí)，為了得到穩(wěn)定且可靠的數(shù)據(jù)，一般需要開(kāi)機(jī)預(yù)熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈，預(yù)熱時(shí)間可以縮短到10min左右。對(duì)某些易感光、易分解的熒光物質(zhì)，盡量采用長(zhǎng)波長(zhǎng)、低人射光強(qiáng)度及短時(shí)間光照。

③溫度變化可引起熒光強(qiáng)度的改變。通常降低溫度，有利于提高熒光量的子產(chǎn)率，熒光強(qiáng)度增大。溫度影響熒光強(qiáng)度的顯著程度因樣品而異，大部分熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度受溫度影響不大，測(cè)試溫度變化不超過(guò)±3℃，對(duì)測(cè)試結(jié)果幾乎無(wú)影響。

④當(dāng)熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時(shí)，溶液的pH對(duì)熒光強(qiáng)度有較大影響。因?yàn)槿跛峄蛉鯄A在不同酸度中，分子和離子的電離平衡會(huì)發(fā)生改變，而熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度會(huì)因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。

⑤分子結(jié)構(gòu)中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中，熒光效率顯著增強(qiáng)。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強(qiáng)度。

⑥瑞利散射和拉曼散射是溶劑的兩種散射光，應(yīng)注意不要誤把瑞利散射和拉曼散射光譜當(dāng)做熒光光譜。瑞利散射光波長(zhǎng)與激發(fā)光波長(zhǎng)相同，拉曼散射與激發(fā)光波長(zhǎng)不同，而熒光物質(zhì)的熒光波長(zhǎng)與激發(fā)光波長(zhǎng)無(wú)關(guān)，因此可以通過(guò)選擇適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)波長(zhǎng)將拉曼散射光與熒光分開(kāi)。在測(cè)試時(shí)選擇合適的狹縫寬度，或者空白扣除，也可以對(duì)散射光的影響進(jìn)行校正。

⑦熒光物質(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導(dǎo)致熒光強(qiáng)度降低，常見(jiàn)的熒光猝滅劑，如鹵素離子、重金屬離子、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。

⑧測(cè)試過(guò)程中注意不要肉眼盯著氙燈光源看，以防眼睛造成損傷。

⑨儀器房應(yīng)注意經(jīng)常通風(fēng)，避免產(chǎn)生的臭氧在室內(nèi)富集。

熒光概論

物體經(jīng)過(guò)較短波長(zhǎng)的光照，把能量?jī)?chǔ)存起來(lái)，然后緩慢發(fā)出較長(zhǎng)波長(zhǎng)的光，發(fā)出的這種光就叫熒光。物質(zhì)在吸收入射光的過(guò)程中，光子能量傳遞給物質(zhì)分子。分子被激發(fā)，電子從較低能級(jí)躍遷到較高能級(jí)，形成電子激發(fā)態(tài)分子。電子的激發(fā)態(tài)的多重態(tài)用2s 1表示，s為自旋角動(dòng)量數(shù)的代數(shù)和，數(shù)值為0或1。分子中同一軌道里所占據(jù)的兩個(gè)電子必須具有相反的自旋方向，即自旋配對(duì)。分子中全部電子都自旋配對(duì)，即s=0，該分子處于單重態(tài)，用S表示。若分子吸收能量后電子躍遷過(guò)程中不發(fā)生自旋方向的變化，這時(shí)分子處于激發(fā)的單重態(tài)；若躍遷伴隨自旋方向改變，這時(shí)分子具有兩個(gè)自旋不配對(duì)的電子，即s=1，分子處于激發(fā)的三重態(tài)，符號(hào)T表示。符號(hào)S0、S1和S2分別表示分子的基態(tài)、和第二電子激發(fā)單重態(tài)，T1和T2則分別表示和第二電子激發(fā)三重態(tài)。

熒光光譜的壽命

熒光物質(zhì)具有兩個(gè)重要的發(fā)光參數(shù)：熒光壽命和熒光產(chǎn)率。熒光壽命（τ）是指當(dāng)激發(fā)停止后，分子的熒光強(qiáng)度降到激發(fā)時(shí)強(qiáng)度的1/e所需的時(shí)間，它表示粒子在激發(fā)態(tài)存在的平均時(shí)間，通常稱為激發(fā)態(tài)的熒光壽命。與穩(wěn)態(tài)熒光提供一個(gè)平均信號(hào)不同，熒光壽命提供的是激發(fā)態(tài)分子的信息，前者可以告訴你事情發(fā)生了，而后者可以告訴你為什么發(fā)生。

熒光光譜儀

隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，在60年代初發(fā)明了半導(dǎo)體探測(cè)器以后，對(duì)X-熒光進(jìn)行能譜分析成了可能。能譜色散型X熒光光譜儀（ED-XRF），用X射線管產(chǎn)生原級(jí)X射線照射到樣品上，所產(chǎn)生的特征X射線（熒光）直接進(jìn)入半導(dǎo)體探測(cè)器，便可以據(jù)此進(jìn)行定性分析和定量分析。

　　由于普通能量色散X熒光采用低功率X射線管，又采用濾光片扣除背景和干擾，其背景偏高，分辨率偏小，使得應(yīng)用范圍受到限制，特別是在輕元素的分析受到限制。隨之X射線偏振器的誕生，產(chǎn)生了一款新型的能量色散X熒光光譜儀，既偏振式能量色散X熒光光譜儀ED（P）-XRF，再加上SDD探測(cè)器的使用，不僅提高了（相對(duì)使用正比計(jì)數(shù)管和Si（PIN）探測(cè)器的儀器）的分辨率，免去Si(Li)探測(cè)器使用液氮冷卻的繁瑣和危險(xiǎn)，填補(bǔ)了原來(lái)普通能量色散X熒光的輕元素檢出限高，分辨率差的缺陷，又使得（相對(duì)波長(zhǎng)色散X熒光用戶）購(gòu)買和使用X熒光儀器的成本大大減低，這使得偏振式能量色散X熒光光譜儀ED（P）-XRF在分析領(lǐng)域的迅猛發(fā)展，越來(lái)越受到廣泛關(guān)注。