武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專(zhuān)業(yè)從事生物醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)、技術(shù)咨詢(xún)及產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的生物技術(shù)服務(wù)企業(yè)。公司坐落于武漢光谷，由3位歸國(guó)博士創(chuàng)辦。公司長(zhǎng)期致力于建立并完善多項(xiàng)基礎(chǔ)生物技術(shù)服務(wù)平臺(tái)?，F(xiàn)憑借自身技術(shù)特色，依托光谷生物城技術(shù)產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢(shì)，面向全國(guó)提供的生物技術(shù)服務(wù)。在研究植物目的基因時(shí)空表達(dá)及分布時(shí)，我們常采用XX辛標(biāo)記的探針來(lái)做植物原位雜交。

雙雜交系統(tǒng)的建立得力于對(duì)真核生物調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始過(guò)程的認(rèn)識(shí)。細(xì)胞起始基因轉(zhuǎn)錄需要有反式轉(zhuǎn)錄因子的參與。80年代的工作表明， 轉(zhuǎn)錄因子在結(jié)構(gòu)上是組件式的（modular）， 即這些因子往往由兩個(gè)或兩個(gè)以上相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，其中有DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DNA binding domain，簡(jiǎn)稱(chēng)為BD）和轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)域（activation domain，簡(jiǎn)稱(chēng)為AD），它們是轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮功能所必需的。

探針標(biāo)記。市售的探針盒子花樣繁多，盡量選擇大品牌的試劑盒。嚴(yán)格按照其操作步驟和條件進(jìn)行。不同廠(chǎng)家的盒子中使用的酶存在差異，因此這一步操作需要根據(jù)實(shí)際情況操作。

雜交液滴到組織上后不要太用力掀開(kāi)蓋玻片，而是在漂洗的時(shí)候采用滴管在其側(cè)面滴洗，輕輕沖下蓋玻片。這一步是很有必要的！而在封片時(shí)，一定要密封好玻片，可以采用凝膠類(lèi)的物質(zhì)封住四周。

原位雜交在前。

（1）常規(guī)脫蠟入水。

（2）37℃蛋白酶K消化20min，37℃漂洗液充分洗去蛋白酶K。

（3）滴加探針，加蓋玻片，避光、濕盒、37℃過(guò)夜孵育。

（4）如果試劑盒允許的話(huà)，將試劑盒中洗脫液水浴加溫至37℃震蕩洗脫多余的探針。

（5）加堿性磷酸酶標(biāo)記的抗1體，37℃孵育半小時(shí)，洗去抗1體后顯色。

免1疫組化在后。

（1）將顯色后確認(rèn)為陽(yáng)性的切片充分漂洗。

（2）在PH為6.0的枸櫞酸鈉溶液中，微波至96℃左右，作用10min。

（3）滴加一抗，37℃濕盒孵育2h。

（4）充分漂洗切片，滴加二抗，室溫下孵育40-50min。

（5）DAB顯色后，采用PBS中止顯色反應(yīng)。

（6）不要復(fù)染核，不然就蓋住原位雜交信號(hào)了。