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發(fā)布時(shí)間:2021-05-27 06:45  
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小G蛋白是從屬于細(xì)胞調(diào)節(jié)因子中的一個(gè)超家族。Rho家族是小G蛋白中的一個(gè)亞家族,它在細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞分裂以及基因轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮主要作用。而本試劑盒中的Cdc42就屬于Rho亞家族中的一種, Cdc42參與生理活動(dòng)過(guò)程中其分子結(jié)構(gòu)會(huì)呈現(xiàn)出2種相互轉(zhuǎn)換的形式:與GTP結(jié)合的激l活狀態(tài)和與GDP結(jié)合的非活性狀態(tài)。
目前Cdc42蛋白活性的檢測(cè)主要是依據(jù)小GTP酶Cdc42可以與p21活化激酶(PAK)的p21結(jié)合區(qū)域(PBD)結(jié)合,使PAK活化從而發(fā)揮生物學(xué)功能,進(jìn)而間接的進(jìn)行Cdc42活性l功能的監(jiān)測(cè)。然而此方法在檢測(cè)過(guò)程中存在著一定的局限性比如GTP水解成GDP的速度過(guò)快以及Cdc42-GTP結(jié)合蛋白與p21結(jié)合區(qū)域之間較低的親和力,導(dǎo)致這種檢測(cè)方法的重復(fù)性較差。
試劑盒成分
特異性識(shí)別Cdc42活性構(gòu)象的鼠單克l隆抗l體(Anti-active Cdc42, Mouse MonoclonalAntibody (Catalog No. 26905)):小管裝--30ul (抗l體濃度是1mg/ml),抗l體溶于PBS(pH7.4)并包含50%的甘油和0.05%的疊氮l化鈉。此抗l體可以特異性識(shí)別所有脊椎動(dòng)物中的Cdc42-GTP。
Protein A/G agarose (Catalog No. 30301) :小管裝—400ul包含200ul Protein A/G agarose 和200ul 20%乙醇溶液。(使用時(shí)溶液需要充分混勻,再吸?。?
5X Assay/Lysis Buffer (Catalog No. 30303):小瓶裝—30mL包含250 mM Tris-HCl (pH 8.0), 750 mM NaCl, 50 mM MgCl2, 5 mM EDTA, 5% Triton X-100。
特異性識(shí)別Cdc42活性構(gòu)象的兔多克l隆抗l體(Anti-Cdc42, Rabbit Polyclonal Antibody (Catalog No.21010)):小管裝--30ul (抗l體濃度是1mg/ml),抗l體溶于PBS(pH 7.4)并包含有 50%的甘油。
100 X GTPγS (Catalog No. 30302) :小管裝—100ul (10 mM) ,實(shí)驗(yàn)中0.5mL細(xì)胞裂解液使用 5ul GTPγS標(biāo)記。
100 X GDP (Catalog No. 30304) :小管裝—100ul (100 mM) ,實(shí)驗(yàn)中0.5mL細(xì)胞裂解液使用5ul GDP標(biāo)記。
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