低溫生物菌種的保存方法

低溫保存法

①簡(jiǎn)單保存法，將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1～2個(gè)月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3～4個(gè)月；

②液氮超低溫保存法，將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中，密封于安瓿管內(nèi)，然后控制冷卻速度，使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí)，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、酵母和原蟲(chóng)、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物，都可用此法長(zhǎng)期保存。

低溫生物菌種——菌種分離方法

寄主分離法即從生長(zhǎng)有某種真菌的寄主體上（如茯苓、木耳木段）取下木片，進(jìn)行分離的方法。如木耳制種時(shí)，可選朵大、出耳多、質(zhì)厚的耳棒（即長(zhǎng)有木耳的木段）。采集后，削去耳根下的樹(shù)皮，將其橫斷面鋸成1 厘米厚的木片，在無(wú)菌條件下，切去無(wú)耳菌絲部分，留下有耳菌絲部分，浸入水中1 分鐘，取出再用無(wú)菌水沖去木片上的液體。然后，用解剖刀將木片切成0 . 5 厘米的小塊，放入斜面培養(yǎng)基內(nèi)，置24 ～26 ℃下培養(yǎng)，及時(shí)淘汰雜菌，選取純菌絲進(jìn)行移植培養(yǎng)，即得菌種。

生物有機(jī)肥產(chǎn)品生產(chǎn)使用現(xiàn)狀

細(xì)菌類(lèi)生產(chǎn)用除常見(jiàn)的芽孢外， 還出現(xiàn)了高地芽孢菌、 類(lèi)干酪乳菌、 屎腸球菌、 鹽居固氮菌等新， 其中， 高地芽孢菌和鹽居固氮菌普遍存在于土壤環(huán)境中， 未見(jiàn)致病性報(bào)道， 屬風(fēng)險(xiǎn)一級(jí)； 類(lèi)干酪乳菌又名為副干酪乳菌， 雖為風(fēng)險(xiǎn)一級(jí) ， 但有從動(dòng)物受傷部位分離到該菌的報(bào)道；屎腸球菌屬于乳酸菌類(lèi)，屬風(fēng)險(xiǎn)二級(jí)， 建議謹(jǐn)慎使用。伯克霍爾德氏菌是一些具有生物防治、 促進(jìn)植物生長(zhǎng)和生物修復(fù)等功能的細(xì)菌， 但同時(shí)也是可以引起鼻疽、 類(lèi)鼻疽病的致病菌， 因此真菌伯克霍爾德氏菌屬于風(fēng)險(xiǎn)三級(jí)， 需做致病性試驗(yàn)， 建議慎用或不用。真菌類(lèi)生產(chǎn)用菌株主要為絲狀真菌和酵母菌。哈茨木霉、 米曲霉、 淡紫紫孢菌、 長(zhǎng)枝木霉、 綠色木霉、 棘孢木霉、 黑曲霉、 粉紅螺旋聚孢霉、 金龜子綠僵菌等屬于生物安全風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)二級(jí)， 需按照NY/T 1109－2017 《微生物肥料生物安全通用技術(shù)準(zhǔn)則》 進(jìn)行毒理學(xué)測(cè)試。酵母菌主要以釀酒酵母為主， 還有少量東方伊薩酵母、杰丁塞伯林德納氏酵母 （原產(chǎn)朊假絲酵母、 杰丁畢赤酵母）、 膜醭畢赤酵母、 解脂耶羅威亞酵母等， 屬于生物安全風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)一級(jí)， 可免做毒理學(xué)試驗(yàn)。

低溫生物處理的優(yōu)勢(shì)

我國(guó)北方污水處理一直受到低溫影響，尤其氨氮處理效果差、出水難以達(dá)標(biāo)等問(wèn)題的困擾。目前污水廠一般采用增加污泥濃度、水力停留時(shí)間、池體保溫加蓋等措施以提高處理效果，但投資和運(yùn)行費(fèi)用增加的問(wèn)題也隨之而來(lái)。溫度降低所導(dǎo)致的生物處理效果下降，歸根結(jié)底是由于當(dāng)水溫低于15℃時(shí)，處生化系統(tǒng)中存在的低溫微生物的數(shù)量和活性不能達(dá)到常溫下中溫菌的水平，污水中的有機(jī)污染物質(zhì)不能被迅速降解所導(dǎo)致的。因此，采用投加耐低溫生物菌劑的方式對(duì)東北地區(qū)污水處理廠生化處理系統(tǒng)的耐低溫改良，對(duì)低溫快速啟動(dòng)和污水處理廠污水穩(wěn)定達(dá)標(biāo)排放意義重大。