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發(fā)布時間:2021-08-28 07:34  

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ELISA試劑盒的組成結(jié)構(gòu)

1、 操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。

5、 保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

此IBL試劑盒能用于小鼠清,EDTA血漿,細胞上清中白介素-6的定量檢測。



ELISA試劑盒的分類

檢測范圍和靈敏度不同,用量少時,可使用分裝,前期是它的長久性不是很好。
試劑盒的標準曲線高點OD 值均在2.0±0.2,零孔的OD 值都控制在0.10以下。
試劑盒的標準曲線相關(guān)系數(shù)R≥0.98。
試劑盒重復(fù)性好,板內(nèi)、板間變異系數(shù)均<9 %。
試劑的組份都多給20%的富余量,確保完成48/96孔的檢測,避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。

檢測抗體及酶結(jié)合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作,保證實驗結(jié)果的重復(fù)性。



ELISA試劑盒主要實驗原理

·包被:抗原或者能以物理性吸附于固相載體表面,原因是蛋白質(zhì)和聚乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原反應(yīng)等活性;

·標記:抗原或者可通過共價鍵與酶連接成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其活性和酶的催化特點;

·顯色:酶結(jié)合物與相應(yīng)包被在固相載體的抗原或者結(jié)合后,也被固定在固相載體上,加入酶的底物之后可出現(xiàn)顯色反應(yīng),根據(jù)反應(yīng)的顏色深淺可計算抗原或者的相對含量。