科學(xué)家在培養(yǎng)轉(zhuǎn)0基因植物時(shí)，常用什么中的質(zhì)粒作為載體？

（1）具有較小的分子量。經(jīng)驗(yàn)表明，為了避免在DNA的純化過程中發(fā)生鏈的斷裂，克1隆載體的分子大小建議不要超過10Kb。pBR質(zhì)粒這種小分子量的特點(diǎn)，不僅易于自身DNA的純化，而且可容納較大的外源DNA部分片段；

（2）具有兩種抗1菌素抗性基因可供作轉(zhuǎn)化子的選擇記號，能指示載體或重組DNA分子是否進(jìn)入宿主細(xì)胞以及外源DNA分子是否插入載體分子形成了重組子。標(biāo)記基因往往可以賦予宿主細(xì)胞一種新的表型，這種轉(zhuǎn)化細(xì)胞可明顯地區(qū)別于非轉(zhuǎn)化細(xì)胞。當(dāng)我們把一個(gè)DNA部分片段插入到某一個(gè)標(biāo)記基因內(nèi)時(shí)，該基因就失去了相應(yīng)的功能。當(dāng)把這種重組DNA分子轉(zhuǎn)到宿主細(xì)胞后，該基因原來賦予的表型也就消失了。要是仍保留了原來表型的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)含有的DNA分子一定不是重組子。很顯然，既要指示外源DNA是否進(jìn)入了宿主細(xì)胞，又要指示載體DNA分子中是否插入了外源DNA部分片段，那么這種載體必須至少具有兩個(gè)標(biāo)記基因。另外，pBR質(zhì)粒載體還具較高的拷貝數(shù)，而且經(jīng)過氯霉1素?cái)U(kuò)增之后，每個(gè)細(xì)胞中可積累1000~3000個(gè)拷貝，這就為重組體DNA的制備提供了極大的方便。

腺病毒(adenovirus)是一種沒有包膜的直徑為70～90 nm的顆粒，由252個(gè)殼粒呈廿面體排列構(gòu)成。每個(gè)殼粒的直徑為7～9 nm。衣殼里是線狀雙鏈DNA分子，約含4.7kb，兩端各有長約100 bp的反向重復(fù)序列。由于每條DNA鏈的5'端同相對分子質(zhì)量為55X103Da的蛋白質(zhì)分子共價(jià)結(jié)合，可以出現(xiàn)雙鏈DNA的環(huán)狀結(jié)構(gòu)。

人體腺病毒已知有52種，分別命名為adl～ad52，研究得詳細(xì)是ad2。腺病毒基因組轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA，已知的轉(zhuǎn)錄單位至少有5個(gè)：EⅠ區(qū)位于病毒基因組左側(cè)，可再分成EⅠA和EⅠB，與細(xì)胞轉(zhuǎn)化有關(guān)；EⅡ區(qū)編碼DNA結(jié)合蛋白，參與病毒的copy；EⅢ區(qū)編碼出現(xiàn)在宿主細(xì)胞表面的一種糖蛋白；EⅣ區(qū)位于ad2基因組右端，受EⅡ區(qū)編碼的DNA結(jié)合蛋白質(zhì)調(diào)控；第5個(gè)轉(zhuǎn)錄單位在病毒感1染中期合成ad2蛋白質(zhì)Ⅳ。

腺病毒分離與鑒定

1．分離培養(yǎng) 標(biāo)本應(yīng)盡早從感1染部位采集。采集患者咽喉、眼分泌物，糞便和尿液等，加抗1生素處理過夜，離心取上清接種敏感細(xì)胞（293、Hep-2或HeLa細(xì)胞等），37℃孵育后可觀察到典型CPE，即細(xì)胞變圓、團(tuán)聚、有拉絲現(xiàn)象，較突出的表現(xiàn)是許多病變細(xì)胞聚在一起呈葡萄串狀。

2．病毒鑒定 用熒光標(biāo)記的抗六鄰體抗1體與分離培養(yǎng)細(xì)胞作用來鑒定腺病毒，也可用血凝抑制（hemoagglutination inhibition，HI）試驗(yàn)或中和試驗(yàn)（neutralization test）檢測屬和組特異性抗原并鑒定病毒的血1清型。腺病毒可用Shell vial技術(shù)進(jìn)行快速鑒定。病毒標(biāo)本經(jīng)抗1生素和離心處理，取上清接種于有細(xì)胞的Shell vial培養(yǎng)瓶，孵育1～2天，用特異性六鄰體單克1隆抗1體對其抗原表位進(jìn)行檢測。也可用病1人鼻粘膜上皮脫落細(xì)胞直接染色檢測病毒抗原。用DNA雜交或內(nèi)切酶酶切等鑒定分離培養(yǎng)的病毒DNA；PCR可用于腺病毒感1染的診斷，引物設(shè)計(jì)主要根據(jù)腺病毒六鄰體、VAI和VAII編碼區(qū)序列，能檢測所有血1清型，而且其敏感性很高，能檢測某些patient潛在的腺病毒。用腺病毒41型BgIII-D片段作探針診斷腺病毒腹瀉，其檢出率可達(dá)80%。

基因是控制生物性狀的基本遺傳單位。19世紀(jì)60年代，奧地利遺傳學(xué)家格雷戈?duì)枴っ系聽柧吞岢隽松锏男誀钍怯蛇z傳因子控制的觀點(diǎn)，但這僅僅是一種邏輯推理。20世紀(jì)初期，遺傳學(xué)家摩爾根通過果蠅的遺傳實(shí)驗(yàn)，認(rèn)識到基因存在于染色體上，并且在染色體上是呈線性排列，從而得出了染色體是基因載體的結(jié)論。1909年丹麥遺傳學(xué)家約翰遜（W. Johansen，1859～1927）在《精密遺傳學(xué)原理》一書中正式提出“基因”概念。