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發(fā)布時(shí)間:2021-08-21 14:50  
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英文全稱是 :in situ hybridization。原位雜交。指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行定量定位的過程。
①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位,可用于基因圖譜,基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究;②組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位,如EB病毒mRNA、人類狀瘤病毒和巨細(xì)胞病毒DNA的檢測;FISH技術(shù)在泌尿系統(tǒng)研究領(lǐng)域的巨大潛力與光明前景將我們進(jìn)入全新時(shí)代。③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的檢測;④基因在染色體上的定位;⑤檢測染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等;⑥分裂間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究,如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定,某些的診斷和生物學(xué)劑量測定等。
Fields等人的工作標(biāo)志雙雜交系統(tǒng)的正式建立。他們以與調(diào)控SUC2基因有關(guān)的兩個(gè)蛋白質(zhì)Snf1和Snf2為模型,將前者與Gal4的BD結(jié)構(gòu)域融合,另外一個(gè)與Gal4的AD結(jié)構(gòu)域的酸性區(qū)域融合,由BD和AD形成的融合蛋白一般分別稱之為“誘餌”(bait)和“獵物”或靶蛋白(prey or target protein)。武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業(yè)從事生物醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)、技術(shù)咨詢及產(chǎn)品開發(fā)的生物技術(shù)服務(wù)企業(yè)。公司坐落于武漢光谷,由3位歸國博士創(chuàng)辦。公司長期致力于建立并完善多項(xiàng)基礎(chǔ)生物技術(shù)服務(wù)平臺(tái)?,F(xiàn)憑借自身技術(shù)特色,依托光谷生物城技術(shù)產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢,面向全國提供的生物技術(shù)服務(wù)。mFISH能同時(shí)檢測多個(gè)基因,分辨復(fù)雜的染色體易位和微小缺失,區(qū)分間期細(xì)胞多倍體和超二倍體等。
在雙雜交鑒定過程中要經(jīng)過兩次轉(zhuǎn)化,這個(gè)工作量是相當(dāng)大的,特別是尋找新的作用蛋白質(zhì)的時(shí)候尤其如此。而且,酵母細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率比細(xì)菌要低約4個(gè)數(shù)量級(jí)。因此轉(zhuǎn)化步驟就成為雙雜交技術(shù)的瓶頸。Bendixen等人通過酵母接合型的引用,避免了兩次轉(zhuǎn)化操作,同時(shí)又提高了雙雜交的效率。
良好的前期標(biāo)本制備十分重要,這點(diǎn)對(duì)于采用秋水仙素刺激得到中期染色體分裂象尤為重要。刺激時(shí)間過短或過長都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)觀察,因此需要耐心摸索作用時(shí)間。
蛋白酶K的作用濃度。濃度高了極易影響細(xì)胞核形態(tài),造成模糊不清,濃度低了則探針不易進(jìn)入細(xì)胞核,雜交率大大降低。石蠟切片一般要達(dá)到10-30min,不要超過半小時(shí),一般來說,20g/L蛋白酶K在50℃下消化20min足矣。
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