液相色譜儀色譜柱失效的原因

裝填不良的色譜柱，在短時(shí)間應(yīng)用后，填充床的壓縮通常使柱頭處產(chǎn)生塌陷，導(dǎo)致柱效突然降低。液相色譜儀色譜柱的初始評(píng)價(jià)指標(biāo)，如塔板數(shù)、不對(duì)稱因子等往往不能很好地表征色譜柱床層的穩(wěn)定性，這種情緒只能在實(shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)。

液相色譜儀色譜柱使用過(guò)程中的驟然壓力波動(dòng)、機(jī)械撞擊或溫度驟然變化都會(huì)對(duì)色譜柱床層產(chǎn)生影響，導(dǎo)致峰形變差和柱效降低。進(jìn)樣過(guò)程中，進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)動(dòng)太慢可引起壓力波動(dòng)，使色譜柱床產(chǎn)生裂隙，在柱切換時(shí)也存在同樣的問題。使用填充良好的色譜柱，在較低柱壓下操作，可大大減少由壓力波動(dòng)造成的色譜柱損壞。

液相色譜儀與氣相色譜區(qū)別

液相色譜儀在基本原理上和氣相色譜儀是一致的，所以設(shè)備的基礎(chǔ)原理差不多，但是他們?cè)跈z測(cè)方面是有不相同的地方的，有不相同的，但又有不同之處：液相色譜 與氣相色譜的主要區(qū)別可歸結(jié)于以下幾點(diǎn)：

1、進(jìn)樣方式的不同：液相色譜儀只要將樣品制成溶液，而氣相色譜需加熱氣化或裂解；2、流動(dòng)相的不同，在被測(cè)組分與流動(dòng)相之間、流動(dòng)相與固定相之間都存在著一定的相互作用力；

3、由于液體的粘度較氣體大兩個(gè)數(shù)量級(jí)，使被測(cè)組分在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體流動(dòng)相中約小4~5個(gè)數(shù)量級(jí)；

4、由于流動(dòng)相的化學(xué)成分可進(jìn)行廣泛選擇，并可配置成二元或多元體系，滿足梯度洗脫的需要，因而提高了液相色譜的分辨率（柱效能）；

5、液相色譜采用5~10Lm細(xì)顆粒固定相，使流體相在色譜柱上滲透性大大縮小，流動(dòng)阻力增大，必須借助高壓泵輸送流動(dòng)相；

6、液相色譜儀是在液相中進(jìn)行，對(duì)被測(cè)組分的檢測(cè)，通常采用靈敏的濕法光度檢測(cè)器，例如，紫外光度檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器 、熒光光度檢測(cè)器等；

7、液相色譜與氣相色譜相比較，液相色譜同樣具有高靈敏度、能和高速度的特點(diǎn)。

8、液相色譜的定性和定量分析，與氣相色譜分析相似，在定性分析中，采用保留值定性，或與其他定強(qiáng)的儀器分析 法連用；在定量分析中，采用測(cè)量峰面積的化法、內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法等，但液相色譜在分離復(fù)雜組分式樣時(shí)，有些組分常不能出峰，因此化法定量受到限制，而內(nèi)標(biāo)法定量則被廣泛使用。

液相色譜柱外界因素影響

色譜是一種分離分析手段，分離是，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球（包括離子交換樹脂）、多孔碳等，其粒度一般為3,5,7,10μm等，柱效理論值可達(dá)5~16萬(wàn)/米。對(duì)于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效；對(duì)于同系物分析，只要500即可；對(duì)于較難分離物質(zhì)對(duì)則可采用高達(dá)2萬(wàn)的柱子，因此一般10~30cm左右的柱長(zhǎng)就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。

柱效受柱內(nèi)外因素影響，為使色譜柱達(dá)到佳效率，除柱外死體積要小外，還要有合理的柱結(jié)構(gòu)（盡可能減少填充床以外的死體積）及裝填技術(shù)。即使好的裝填技術(shù)，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏松，易產(chǎn)生溝流，流速較快，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬，這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中，柱外效應(yīng)對(duì)柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。