等溫核酸試劑盒

什么是RPA?

概念:

重組酶聚合酶擴(kuò)增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被稱(chēng)為是可以替代PCR的核酸檢測(cè)技術(shù)。RPA技術(shù)主要依賴(lài)于三種酶:能結(jié)合單鏈核酸（寡核苷酸引物）的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白（SSB）和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，適宜反應(yīng)溫度在37°C左右。

RPA不受場(chǎng)地的限制，不需要昂貴儀器，對(duì)溫度要求低，恒溫?cái)U(kuò)增，時(shí)間短，可以在資源匱乏地區(qū)實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)的目的，目前已廣泛用于食品安全及動(dòng)物疫病檢測(cè)，但國(guó)內(nèi)就PRA技術(shù)在禽病病原檢測(cè)中的研究并不多。未來(lái)RPA技術(shù)可能在以下方面進(jìn)一步突破：①研發(fā)專(zhuān)門(mén)引物設(shè)計(jì)軟件，降低引物設(shè)計(jì)難度。②反應(yīng)溫度范圍拓寬，不局限于某一溫度，可在某溫度范圍內(nèi)完成擴(kuò)增反應(yīng)。③實(shí)現(xiàn)多重檢測(cè)，結(jié)果判定更簡(jiǎn)便直觀。④可擴(kuò)增長(zhǎng)片段核酸。⑤研發(fā)出低廉的酶制劑，降低成本。相信隨著技術(shù)不斷進(jìn)步，勢(shì)會(huì)引起一場(chǎng)核酸檢測(cè)的革命，取代PCR技術(shù)在分子檢測(cè)中的霸主地位，在禽病病原的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)中發(fā)揮更大的作用。

核酸試劑盒

LAMP:環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法的特征是針對(duì)目標(biāo)DNA鏈上的六個(gè)區(qū)段設(shè)計(jì)四個(gè)不同的引物然后再利用鏈置換反應(yīng)在一定溫度下進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)只需要把基因模板、引物、鏈置換型DNA合成酶、基質(zhì)等共同置于一定溫度下(60~65℃)、經(jīng)一個(gè)步驟即可完成。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng) DNA合成，對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的 DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個(gè)體系中，由兩個(gè)相對(duì)的引物起始一個(gè)合成事件。

RPA是什么？

自PCR技術(shù)誕生以來(lái)已經(jīng)有三十年了。從經(jīng)典PCR、實(shí)時(shí)定量PCR再到現(xiàn)在的數(shù)字PCR，這一技術(shù)在不斷蛻變卻從未淡出我們的視野。英國(guó)TwistDx Inc公司開(kāi)發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被稱(chēng)為是可以替代PCR的核酸檢測(cè)技術(shù)。以此為基礎(chǔ)的TwistAmp? 核酸擴(kuò)增產(chǎn)品，能夠在15分鐘內(nèi)進(jìn)行常溫下的單分子核酸檢測(cè)。該技術(shù)對(duì)硬件設(shè)備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物防御和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。