免l疫印跡和檢測（所有步驟均在室溫下攪拌）

1.在電印跡步驟之后，將PVDF膜浸入100％甲l醇中15秒鐘，然后使其在室溫下干燥5分鐘。注意：如果使用硝l酸纖維素代替PVDF，則應(yīng)跳過此步驟。

2.在室溫下不斷攪拌下，在TBST中用5％脫脂奶粉或3％BSA封閉膜1小時(shí)。

將膜與抗Arf 6兔多克l隆抗l體在5％脫脂奶粉或3％BSA / TBST中以1：50?1000（取決于樣品中Arf 6蛋白質(zhì)的量）新鮮稀釋，孵育1-在室溫下持續(xù)攪拌2小時(shí)或過夜4oC。

3.用TBST將印跡的膜清洗3次，每次5分鐘。

4.將膜與二抗（例如山羊抗兔IgG，HRP偶聯(lián)物）一起孵育，在室溫下以恒定的比例在5％脫脂奶粉或3％BSA / TBST中以1：1000的比例新鮮稀釋。攪動。

5.用TBST將印跡的膜清洗3次，每次5分鐘。

6.使用您選擇的檢測方法，例如ECL。

電泳和轉(zhuǎn)膜

1. 取15ul樣品/孔上樣17%配體膠。

2. 按照制造商的說明進(jìn)行SDS-PAGE。

3. 按照制造商的說明將凝膠蛋白轉(zhuǎn)到PVDF或硝化纖l維素膜。

免l疫印跡反應(yīng)和檢測（所有步驟都是在室溫下進(jìn)行，并不斷攪拌）

1. 將PVDF膜浸入100%甲l醇15s，然后在室溫放置5 min晾干。

注意：如果使用的是硝化纖l維素膜，此步省略。

2. 封閉：用TBST緩沖液配制5%的脫脂牛奶或者3%BSA在室溫下孵育1H進(jìn)行封閉，并需要恒定振蕩。

3. 孵育一抗：用TBST緩沖液配制的5%脫脂牛奶或3%BSA稀釋特異性識別Cdc42活性構(gòu)象的兔多克l隆抗l體（稀釋比例為1:50-1:1000，主要根據(jù)樣品中含有的Cdc42蛋白的量），室溫下孵育1-2小時(shí)，或者4°C條件下過夜孵育。

4. 用TBST緩沖液洗滌膜三次/5min。

5. 孵育二抗：（例如羊抗兔IgG-HRP），用TBST緩沖液配制的5%脫脂牛奶或3%BSA按1:1000稀釋比例稀釋后使用，室溫下孵育1小時(shí)并恒定振蕩。

6. 用TBST緩沖液洗滌膜三次/5min。

7. 使用實(shí)驗(yàn)者所選擇的檢測方法進(jìn)行顯色如ECL顯色法。

GTPases的Rab家族調(diào)節(jié)真核水泡膜運(yùn)輸。 Rab35與兩個(gè)血漿

膜和內(nèi)體定位，并涉及到包括T細(xì)胞受體回收，卵母細(xì)胞卵黃蛋白回收和胞質(zhì)分裂在內(nèi)的各種過程。 Rab35調(diào)節(jié)神經(jīng)元樣細(xì)胞中的神經(jīng)突生長，并可以誘導(dǎo)突起。

當(dāng)前沒有直接測定法來測量Rab35 GTPases的活化。

NewEast Biosciences Rab35激l活檢測試劑盒基于特定于配置的單克l隆

特異性識別Rab35 GTP而不識別Rab Rab35 GDP的抗l體。鑒于...的高度親和力

抗原的單克l隆抗l體，可以在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行激l活測定。這個(gè)

分析提供了可靠的結(jié)果，并具有一致的可重復(fù)性。

這些抗Rab35 GTP單克l隆抗l體也可以用于監(jiān)測大鼠Rab35的激l活。

1細(xì)胞和組織中的免l疫組織化學(xué)。

NewEast Biosciences Rab35激l活檢測試劑盒提供了一種簡單快速的方法來監(jiān)測

Rab35的激l活。每個(gè)試劑盒均提供足夠的量以執(zhí)行20個(gè)測定。

目前還沒有直接測定Arl1-gtpase活性的方法。NewEast Biosciences Arl1激l活檢測試劑盒是基于特定構(gòu)型的單克l隆抗l體特異性識別Arl1 GTP，但不識別Arl1 GDP的抗l體。鑒于克l隆抗l體對其抗原，活化試驗(yàn)可在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行。這個(gè)分析結(jié)果可靠，重現(xiàn)性一致。