蛋白結(jié)晶板實(shí)驗(yàn)研究

大分子生物藥以晶體形式作為給藥的方式具有穩(wěn)定性高,有效成分濃度高以及容易實(shí)現(xiàn)的可控性釋放等許多優(yōu)點(diǎn).然而,,截至2004年的150多種生物藥中,以晶體為其主要的生產(chǎn)和銷售形態(tài)的只有胰島素.造成這種情況的主要技術(shù)原因是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)結(jié)晶和小分子結(jié)晶相比具有更為復(fù)雜的結(jié)晶環(huán)境和影響因素,大規(guī)模生產(chǎn)蛋白質(zhì)晶體在方法和技術(shù)上還很不成熟。

蛋白結(jié)晶板研究

再用原子力顯微鏡,磷光成像儀,光密度儀或激光共聚焦掃描儀進(jìn)行檢測,獲得靶蛋白表達(dá)的種類,數(shù)量及關(guān)聯(lián)等信息.蛋白質(zhì)芯片已經(jīng)用于研究蛋白質(zhì)表達(dá)譜構(gòu)成及變化,蛋白質(zhì)與生物分子(蛋白質(zhì),核酸,配體等)的相互作用,抗原體篩選,酶與底物相互作用.蛋白質(zhì)芯片在醫(yī)學(xué)臨床診斷,分析和篩選方面具有潛在的重要應(yīng)用價(jià)值。

蛋白結(jié)晶板

蛋白質(zhì)溶液和含有沉淀劑的溶液是彼此分層在一個(gè)有小孔的毛細(xì)管中，一個(gè)測熔點(diǎn)用的毛細(xì)管一般即可（如圖1.2）。下層是密度大的溶液，例如銨或PEG溶液。如果如MPD被用作沉淀劑，它會(huì)在上層。以1：1混合，沉淀劑的濃度應(yīng)該是所期終濃度的二倍。兩種溶液（各自約5μl）通過針頭導(dǎo)入毛細(xì)管，先導(dǎo)入下層的。通過一個(gè)簡易的搖擺式離心機(jī)去除氣泡。再加入上層，進(jìn)而兩層之間形成一個(gè)明顯的界面。

蛋白質(zhì)晶體板

半胱氨酸、賴氨酸的蛋白質(zhì)、以及含有金屬離子的蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)的吸附會(huì)導(dǎo)致重組蛋白質(zhì)純度大幅降低。為了解決這一問題,我們制備了兩類新材料,用于提高重組蛋白質(zhì)純度:1)通過分子印跡技術(shù),以組氨酸標(biāo)簽為模板,在IMAC材料表面形成組氨酸標(biāo)簽的分子印跡層,使得不含組氨酸標(biāo)簽的蛋白質(zhì)無法靠近IMAC材料,從而提高重組蛋白純度;2)通過活性可控自由基聚合,在IMAC基質(zhì)材料表面包被了一層尺寸可控的聚合物涂層。在聚合物網(wǎng)絡(luò)的篩分作用下,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)帶組氨酸標(biāo)簽的重組蛋白的純化。