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發(fā)布時(shí)間:2021-01-16 07:10  
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很多實(shí)驗(yàn)的pH值設(shè)定在 7.4以模仿生物條件。假如你的蛋白在這個(gè)pH值下是穩(wěn)定的,那就非常棒了!如果不是,就需要改變pH值找到目的蛋白在溶液中處于可溶性且不會(huì)降解的狀態(tài)。
一個(gè)經(jīng)驗(yàn)法則是:蛋白在它等電點(diǎn)pI附近的pH值溶液中會(huì)表現(xiàn)得不易溶解,因?yàn)榈鞍自谄涞入婞c(diǎn)的pH值溶液中表面沒有凈電荷,從而容易聚集。這里推薦用Expasy的ProtParam工具快速簡(jiǎn)便地計(jì)算蛋白等電點(diǎn)pI值,只要提交蛋白序列即可。
20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,輕輕搖動(dòng),直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。
10mg/mlRnase(無DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白R(shí)NA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl調(diào)pH至7.5,于-20℃貯存。(配制過程中要戴手套)
5mol/L氯化鈉(NaCl):溶解29.2g氯化鈉于足量的水中,定容至100ml。
10N(NaOH):溶解400g顆粒于約0.9L水的燒杯中(磁力攪拌器攪拌),完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸鈉):稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中,用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使終體積為100ml。