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發(fā)布時(shí)間:2020-12-08 13:05  
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Tris緩沖液不僅被廣泛用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑,還有許多重要用途。Tris被用于不同pH條件下的蛋白質(zhì)晶體生長。Tris緩沖液的低離子強(qiáng)度特點(diǎn)可用于線蟲(C. elegans)核纖層蛋白(lamin)的中間纖維的形成。Tris也是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一。此外,Tris還是制備表面活性劑、硫化促進(jìn)劑和一些的中間物。Tris也被用作滴定標(biāo)準(zhǔn)物。緩沖特性Tris為弱堿,在室溫(25℃)下,它的pKa為8.1;根據(jù)緩沖理論,Tris緩沖液的有效緩沖范圍在pH7.0到9.2之間。Tris堿的水溶液pH在10.5左右,一般加入鹽酸以調(diào)節(jié)pH值至所需值,即可獲得該pH值的緩沖液。但同時(shí)應(yīng)注意溫度對(duì)于Tris的pKa的影響。
TBST緩沖液 TBST中含有Tris-HCl,NaCl,tween20這三種物質(zhì),是做Western Blotting中常用的一種洗膜緩沖液。目的是洗掉非特異性吸附的蛋白質(zhì),并且維持一個(gè)接近的天然環(huán)境。其中,Tween是一種離子表面活性劑,可加速非特異性結(jié)合的分離。因?yàn)閃estern Blotting中所用的膜可以與蛋白質(zhì)結(jié)合,孵育過程中,能夠與膜非特異性結(jié)合。為了防止以后曝光造成膠片背景太高,在孵育后,混有Tween 20的TBS 能夠?qū)⒎翘禺愋越Y(jié)合的洗掉,增加特異性。
此外,一些緩沖體系對(duì)溫度非常敏感,例如Tris-HCl緩沖液,如果你在25℃時(shí)將緩沖體系調(diào)至pH值8,pH值將在5℃時(shí)增加到8.58而在37℃時(shí)降到7.71。所以,如果打算在4℃條件下保存蛋白或在37℃進(jìn)行實(shí)驗(yàn),就應(yīng)該考慮到室溫下調(diào)的pH值可能在實(shí)驗(yàn)條件中就不適用了。 其他類型的色譜分離柱,如凝膠過濾柱和Ni2 親和層析柱,可能需要更高的鹽濃度。我一般用高達(dá)500 mM NaCl進(jìn)行高鹽淋洗,以防止蛋白和柱之間的非特異性結(jié)合。
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