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發(fā)布時間:2020-12-22 03:38  
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化學還原劑:Tris具有三個同等地位的羥基,可作為一種良好的還原劑。有研究人員利用Tris作為還原劑,在堿性條件下,通過超聲還原氯金酸溶液,無需加入其它穩(wěn)定劑,即可制得相對穩(wěn)定的金納米顆粒,實現(xiàn)了環(huán)境友好型和生物相容型的金納米粒子合成。實驗條件溫和,操作簡便易行,而且綠色無污染,低毒低成本。Tris應用廣泛,從實驗室的生物化學實驗,到工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn),再到日常生活用品,都少不了它的身影。而說起它的毒性,比起一些令人聞風喪膽的試劑算是小菜一碟,但是日久年深的侵蝕也不得不防。Tris可以通過吸入、攝入、皮膚吸收身體,因此,對于現(xiàn)場實驗人員,操作時戴好手套和護目鏡不失為一種有效的防護措施,安全生產(chǎn)方能放心使用。
Tris緩沖液為弱堿性溶液,DNA在這樣的溶液中會被去質子化,從而提高其溶解性,所以在核酸的溶解及核酸提取中一般也使用Tris緩沖液。需要注意的是,因其配置溶液時顯堿性,會吸收部分空氣中能生成碳酸的二氧化碳氣體,所以需要將盛裝Tris溶液的瓶蓋蓋嚴。另外Tris溶液對溫度敏感,每升高1度,pH值下降0.03,配置時需維持在室溫。
02、緩沖溶液的選擇與計算
為了保證緩沖溶液有足夠強的緩沖能力,在配制緩沖溶液時,需要做到:
為使共軛酸堿對的濃度比接近于1,應根據(jù)所需要維持的pH范圍選擇合適的緩沖對,使其中的弱酸的PKa等于或接近于所要求的pH。
例如,生物培養(yǎng)液中需用PH=7.0的緩沖溶液,已知H2PO4-的pKa2=7.21,因此,H2PO4—HPO42-是可以選擇的合適的緩沖對。如若配制PH=9.0的緩沖溶液,則可選擇NH3·H2O-NH4Cl緩沖對(pKa(NH4 )=9.25)。
蛋白制備及純化過程中緩沖液的選擇非常重要,合適緩沖液才能保證蛋白的活性和結構穩(wěn)定。
當我們純化蛋白時,的就是要保持蛋白在純化過程中不能失活,或者是盡量降低純化過程對蛋白活性帶來的損失。這就意味著蛋白在整個純化過程中要始終保持可溶性和活性。
因此設計一個防止蛋解和聚合的蛋白純化緩沖體系就非常重要了,尤其會凸顯在實驗結果上。在設計緩沖buffer時應考慮以下幾個因素:pH值、緩沖體系、鹽離子、還原劑和穩(wěn)定劑。其中每一個因素都要根據(jù)你的目的蛋白進行優(yōu)化,并以目的蛋白的活性作為優(yōu)化的評估標準。