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沈陽(yáng)洋蔥亞細(xì)胞定位培養(yǎng)電話「在線咨詢」

發(fā)布時(shí)間:2020-08-10 06:47  

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武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開(kāi)展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。結(jié)果成功構(gòu)建了2種融合了目的基因和GFP的表達(dá)載體pER35GFP-FMF和pER35FMF-GFP。





泛素-蛋白酶體通路在植物防衛(wèi)反應(yīng)(包括反應(yīng))中發(fā)揮重要作用,泛素連接酶(ubiquitin ligase, E3)則是參與這一過(guò)程的重要組分。序列分析表明OsSsr1的開(kāi)放閱讀框?yàn)?004bp,編碼一個(gè)由667個(gè)氨基酸組成并含有5個(gè)跨膜區(qū)的蛋白,該蛋白N端含有一個(gè)信號(hào)肽。本研究旨在通過(guò)和分析與馬鈴薯晚疫病抗性相關(guān)的泛素連接酶家族中的成員,初步揭示這類基因在馬鈴薯晚疫病垂直抗性和水平抗性中的調(diào)控作用,或它們?cè)隈R鈴薯防御晚疫病菌侵染的信號(hào)傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)中的作用,為進(jìn)一步深入開(kāi)展抗性機(jī)理研究奠定基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)室從晚疫病誘導(dǎo)的馬鈴薯水平抗性材料構(gòu)建的cDNA文庫(kù)中篩選出兩個(gè)與Avr9/Cf-9 rapidly elicited protein (ACRE,具有泛素連接酶E3活性)基因有很高同源性的EST片段(10-A12和08-E12)。本研究中,我們了這兩個(gè)EST片段所代表的基因,StRFP和StPUB,并研究了其生物學(xué)功能。 StRFP基因的全長(zhǎng)cDNA為1354 bp,包含一個(gè)789 bp的開(kāi)放閱讀框(ORF),編碼262個(gè)氨基酸,含有高度保守的RING-H2型RING指結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和GLD結(jié)構(gòu)域,是一個(gè)新的馬鈴薯ATL (Arabidopsis toxico para levadura)蛋白。StRFP基因位于馬鈴薯第3條染色體上,不含內(nèi)含子。馬鈴薯基因組中可能有1-2個(gè)StRFP基因拷貝或與之同源性高的基因。利用洋蔥表皮細(xì)胞進(jìn)行的StRFP-GFP融合蛋白亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示,StRFP在細(xì)胞膜上或膜外表達(dá)。


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幾丁質(zhì)酶(chitinase)是一種能夠?qū)锥≠|(zhì)水解成N-乙酰葡糖胺的糖苷酶,廣泛存在于植物細(xì)胞中,是抗真菌防衛(wèi)反應(yīng)體系的重要組成部分.該文深入分析了1種三七幾丁質(zhì)酶基因PnCHI1的功能.構(gòu)建PnCHI1的亞細(xì)胞定位載體,轉(zhuǎn)入洋蔥表皮細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá),在激光掃描共聚焦顯微鏡下發(fā)現(xiàn)PnCHI1定位于細(xì)胞壁中.構(gòu)建PnCHI1的原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)并純化獲得重組蛋白,體外平板抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PnCHI1原核重組蛋白對(duì)尖孢鐮刀菌、茄腐鐮刀菌、輪枝鐮刀菌3種三七根腐病菌的菌絲生長(zhǎng)具有很強(qiáng)的抑制活性.采用反向遺傳學(xué)技術(shù)驗(yàn)證PnCHI1的功能,通過(guò)根癌農(nóng)介導(dǎo)將PnCHI1轉(zhuǎn)入中過(guò)量表達(dá).qRT-PCR分析結(jié)果表明PnCHI1在T2代轉(zhuǎn)基因中大量表達(dá),同時(shí)葉片接種實(shí)驗(yàn)顯示PnCHI1轉(zhuǎn)基因?qū)η迅牭毒目剐栽鰪?qiáng)明顯.結(jié)論:PnCHI1是定位于細(xì)胞壁的幾丁質(zhì)酶,體外能抑制幾種三七根腐病真菌,在過(guò)表達(dá)大大提高了對(duì)茄腐鐮刀菌的抗性,推測(cè)PnCHI1是三七中參與根腐病防衛(wèi)反應(yīng)的重要抗病基因.


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脂肪族昔(aliphatic glucosinolates, AGSL)是一種廣泛存在于十字花科植物中的含氮、含硫的植物次生代謝產(chǎn)物,其降解產(chǎn)物(如蘿卜硫素)不僅在植物防御、響應(yīng)生物或非生物脅迫的生理過(guò)程中具有重要的作用,而且還具有極強(qiáng)的活性。以生菜、洋蔥、蘿卜為試材,用轉(zhuǎn)人植物表達(dá)載體pSH-NGN的根癌農(nóng)EHA105分別采用真空滲透法和直接注射法瞬時(shí)表達(dá)ChIFN-γ蛋白,研究其宿主植物和方法。MYB28和MYB29是調(diào)控脂肪族GSL生物合成的兩類重要轉(zhuǎn)錄因子。在擬南芥中MYB28和MYB29直接調(diào)控脂肪族苷的合成。在十字花科蔬菜中,青花菜中的苷含量較為豐富,成分更為復(fù)雜,目前國(guó)內(nèi)外對(duì)青花菜AGSL生物合成途徑中的結(jié)構(gòu)基因研究的較多,而對(duì)其中起調(diào)控作用的轉(zhuǎn)錄因子的研究則相對(duì)較為滯后。