熒光定量PCR儀的相關(guān)介紹

PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板，從而進(jìn)入平臺(tái)期。在傳統(tǒng)的PCR 中，常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測(cè)PCR反應(yīng)的終擴(kuò)增產(chǎn)物，因此用此終點(diǎn)法對(duì)PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處。

在real-time Q-PCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)和連續(xù)地分析擴(kuò)增相關(guān)的熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)時(shí)間的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)的變化可以繪制成一條曲 線。在PCR反應(yīng)早期，產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別，而后熒光的產(chǎn)生進(jìn)入指數(shù)期、線性期和終的平臺(tái)期，因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點(diǎn) 上來檢測(cè)PCR產(chǎn)物的量，并且由此來推斷模板當(dāng)初的含量。

熒光定量PCR儀Ct值的含義

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每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明，每個(gè)模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的 對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，因此只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣 品的起始拷貝數(shù)。

熒光定量PCR儀的相關(guān)應(yīng)用

血液檢驗(yàn)

漏檢率由于實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法比Elisa靈敏很多，因此，血站或血液研究所一般用來研究Elisa方法的漏檢率，即分析Elisa方法測(cè)定為陰性的血樣，再用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法來復(fù)檢。復(fù)檢時(shí)，一般24個(gè)Elisa陰性的血樣混合成一個(gè)樣本進(jìn)行檢測(cè)。上海用此方法在用于血液制品的血液中發(fā)現(xiàn)一例HIV，后經(jīng)測(cè)定供血者，證實(shí)人的確是HIV陽性。北京市紅十字血液中心正在測(cè)定北京血站中5萬份Elisa陰性血樣的漏檢率。由于不同地區(qū)所用的Elisa試劑、方法、批號(hào)等都不相同，因此不同地區(qū)都有必要進(jìn)行這一工作。

熒光定量PCR儀的部分應(yīng)用

萊普特科學(xué)儀器（北京）有限公司是一家專業(yè)從事實(shí)驗(yàn)儀器生產(chǎn)、銷售和服務(wù)的企業(yè)。我們您分析該行業(yè)的以下信息。

新的愈后指標(biāo)的研究

對(duì)于疾病，在藥作用至一定程度后，就認(rèn)為可以停藥了，但是應(yīng)該在什么停藥，現(xiàn)在大都沒有一個(gè)明確的指標(biāo)，現(xiàn)在所用的指標(biāo)由于受到檢測(cè)方法的靈敏度及準(zhǔn)確性限制，這一指標(biāo)未必合理，因此有必要對(duì)治好的指標(biāo)以及指標(biāo)與發(fā)率以及疾病轉(zhuǎn)化為其他疾病之間的關(guān)系等進(jìn)行進(jìn)一步的研究，從而為藥或療法徹底治好疾病打下堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。