出現(xiàn)的PCR擴增條帶與目的靶序列條帶一致，有時其條帶更整齊，亮度更高。

引物設(shè)計不合適：選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性，因而在進行PCR擴增時，擴增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出現(xiàn)假陽性。需重新設(shè)計引物。

靶序列或擴增產(chǎn)物的交叉污染：這種污染有兩種原因：一是整個基因組或大片段的交叉污染，導(dǎo)致假陽性。這種假陽性可用以下方法解決：操作時應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外。除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器材均應(yīng)高壓消毒。所用離心管及樣進槍頭等均應(yīng)一次性使用。必要時，在加標本前，反應(yīng)管和試劑用紫外線照射，以破壞存在的核酸。二是空氣中的小片段核酸污染，這些小片段比靶序列短，但有一定的同源性。可互相拼接，與引物互補后，可擴增出PCR產(chǎn)物，而導(dǎo)致假陽性的產(chǎn)生，可用巢式PCR方法來減輕或消除。

低嚴格單鏈特異性引物PCR (Lowstringencysingle specific primer PCR, LSSP- PGR)技術(shù)

LSSP - PCR是建立在PCR基礎(chǔ)上的又一種新型基因突變檢測技術(shù)。要求是“二高一低”。高濃度的單鏈引物( 5-端/ 3-端引物均可).約4. 8Lmol高濃度的Taq酶( 16Lmol/ 100ml) 低退火溫度( 300.所用的模板必須是純化的DNA部分片段。在這種低嚴格條件下。引物與模板間發(fā)生不同程度的錯配。形成多種大小不同的擴增產(chǎn)物。經(jīng)電泳分離后形成不同的帶型。對同一目的基因而言。所形成的帶型是固定的。因而稱之為“基因標簽”。這是一種檢測基因突變或進行遺傳鑒定的快速敏感方法。

PCR有哪些應(yīng)用領(lǐng)域？

基因表達

通?？赏ㄟ^PCR來檢測不同細胞類型、組織和生物體在特定時間點的基因表達差異。首先，從目標樣品中分離出RNA并將mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。隨后，通過由PCR擴增的cDNA數(shù)量，確定mRNA的初始水平。這一過程也被稱為逆轉(zhuǎn)錄PCR。

終點PCR 可通過凝膠里的擴增產(chǎn)物條帶強度對RNA的表達進行定量（一種半定量方法）。例如，對起始cDNA進行連續(xù)稀釋并擴增。通過凝膠電泳使不同起始量的終點PCR得率可視化，然后對條帶強度進行定量，并以管家基因為參照進行標準化，預(yù)估擴增靶點的相對表達水平。如今，終點PCR已基本被實時PCR 或qPCR 取代了，因為它們可獲得更可靠和更準確的基因表達定量結(jié)果。