動物組織細胞基因組DNA提取

操作步驟

1. 取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉(zhuǎn)入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶K

（500ug/ml）20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉(zhuǎn)入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數(shù)次。于臺式離心機以12000 rpm離心5min，取上清液入另

一離心管中。

2.加2倍體積異，倒轉(zhuǎn)混勻后，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul TE 重新溶解。（可進行PCR反應等，需要進一步純化的按下列步驟進行）

3.加等量的酚??振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

4.取上層溶液至另一管，加入等體積的?，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/L氨加入2倍體積的無水乙醇，混勻后室溫沉淀2min ，離心12000 rpm ,10min。

6.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。

7.用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm ， 5min。

8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。

9.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存?zhèn)溆谩?

10.吸取適量樣品于GeneQuant上檢測濃度和純度。

  全轉(zhuǎn)錄組測序    

全轉(zhuǎn)錄組是指特定組織或細胞在特定狀態(tài)下所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的總和，包括mRNA和各種noncoding RNA。我們知道生物體本身的轉(zhuǎn)錄過程是一個動態(tài)變化且十分復雜的分子作用網(wǎng)絡，如果只是對某個單一RNA分子的研究，有時并不能準確的發(fā)現(xiàn)分子作用機制。轉(zhuǎn)錄組測序（RNA-Seq）是指利用第二代高通量測序技術進行cDNA測序，快速地獲取某一物種特定qi官或組織在某一狀態(tài)下的轉(zhuǎn)錄本。而競爭性內(nèi)源RNA(ceRNA)理論闡述了一種全新的轉(zhuǎn)錄調(diào)控模式：ceRNA（包括lncRNA、circRNA、mRNA、假基因等）分子能夠通過miRNA應答元件（microRNA Respe Element, MRE）競爭性地結(jié)合相同的miRNA來調(diào)節(jié)彼此的表達水平。舉個例子：miRNA會導致基因沉默現(xiàn)象發(fā)生，而如果lncRNA競爭性結(jié)合了miRNA，從而影響了miRNA基因沉默功能實現(xiàn)。

      ceRNA是目前轉(zhuǎn)錄調(diào)控領域的熱點內(nèi)容之一，通過全轉(zhuǎn)錄組研究能夠系統(tǒng)性的闡述ceRNA的分子作用機制。目前對全轉(zhuǎn)錄組簡便的方法就是構建2個測序文庫分別進行測序。如測序序列已知，可通過序列比較以星號標出差異堿基處，提高工作效率。標準的生物信息學分析能夠得到mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA各自的研究內(nèi)容，靶向調(diào)控網(wǎng)絡、ceRNA網(wǎng)絡、共表達網(wǎng)絡分析可以將這幾種RNA聯(lián)合起來分析，從而發(fā)現(xiàn)新的調(diào)控網(wǎng)絡模型。去除rRNA的鏈特異性文庫，含有的RNA信息含量十分豐富，通過測序和生物信息學分析能夠得到mRNA、lncRNA、circRNA的鑒定及注釋信息。不過該文庫構建時會進行片段化選擇從而濾掉了small RNA的信息，所以需要另外再構建一個small RNA文庫，進行測序分析后可以得到miRNA和其他small RNA的鑒定及注釋信息。全轉(zhuǎn)錄組測序方案路線圖如下所示：

蛋白質(zhì)定量組學服務

細胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動態(tài)變化對不同生命過程有重要影響。若miRNA與mRNA的結(jié)合位點不配對，則抑制mRNA的翻譯。例如在許多疾病的發(fā)生和發(fā)展進程中，常常伴隨著某些蛋白質(zhì)的表達異常。目前定量蛋白質(zhì)組學技術主要分為標記(label)策略和非標記的(label free)定量策略，其中標記策略又分為體內(nèi)標記(如 SILAC、15N 標記)，以及體外標記(如 iTRAQ、TMT 標記) 。

傳統(tǒng)的基于2D雙向凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)組通?？梢澡b定出約1000種蛋白，對全蛋白質(zhì)組的覆蓋僅在5~10%左右，不能滿足高通量定量蛋白質(zhì)表達譜分析的要求。高l效毛細管電泳法(High-performanceCapillaryElectrophoresis,HPCE)這是一-種利用窄孔熔融石英毛細管來從復合物中分離不同化學組分的技術。我們結(jié)合樣品制備與高分辨率、高靈敏度的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術，可在細胞與組織類樣品中鑒定直至多于10000個蛋白，對全蛋白質(zhì)組的覆蓋>60%。結(jié)合生物信息學分析，為您構建高通量蛋白質(zhì)定量表達譜。