PCR實驗室工作基本原則

實驗室的清潔應(yīng)當(dāng)按試劑貯存和準備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū)域應(yīng)當(dāng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。

PCR實驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備

樣品制備區(qū)：主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。

PCR實驗室布局

PCR實驗室原則上為試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域并設(shè)有專用走廊，各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間，工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。

PCR實驗室注意事項——標(biāo)本制備區(qū)

由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件，避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。

實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等，只能從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū)，即從試劑準備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流動。

PCR實驗室又叫基因擴增實驗，PCR是聚合酶鏈式反應(yīng)簡稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA，可看作生物體外的特殊DNA。通過DNA基因追系統(tǒng)，能迅速掌握生物體內(nèi)的病毒含量，其精準度高達納米級別。

不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨立的，各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志，不能直通，如果緊密相連，需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴增前區(qū)，后兩區(qū)為擴增后區(qū)，擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應(yīng)嚴格分開。

擴增區(qū)：主要進行DNA擴增。此外，已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)主要設(shè)備有：擴增儀、冰箱、離心機、加樣器等。