低溫生物菌種的實驗器材

細菌、酵母菌，霉菌。肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基，滅菌脫脂牛乳，滅菌水，化學純的液體石蠟，甘油，河沙，瘦黃土或紅土、鹽，干冰，95%酒精，10%鹽酸，無水氯化鈣。滅菌吸管，滅菌滴管，滅菌培養(yǎng)皿，管形安瓿管，淚滴形安瓿管（長頸球形底），40目與 100目篩子，油紙，濾紙條（0.5×1.2cm），干燥器，真空泵，真空壓力表，噴燈，L形五通管，冰箱，低溫冰箱（-30℃），液氮冷凍保藏器。

低溫生物菌種知多少？

實驗室菌種的傳代保藏過程

1. 按菌種說明書要求復溶菌粉，轉(zhuǎn)種于適當?shù)脑鼍囵B(yǎng)基內(nèi)（G1），復壯后轉(zhuǎn)接至平板上，并于適當溫度下培養(yǎng)適當時間，分離出單個純種菌落，此為第2代（G2）。

2. 菌種鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管，同時挑取純菌落轉(zhuǎn)接斜面菌種作為工作用菌種。此時，保藏菌種為第2代，但工作用菌種則為第三代。

3. 將第2代菌種管冷凍保存，將工作用菌種于適當溫度下培養(yǎng)適當時間后可用于試驗。

4. 取一支冷凍保存的G2代菌種轉(zhuǎn)種于平板和斜面培養(yǎng)基上，平板上的菌種制成冷凍保藏管第三代（G3），斜面培養(yǎng)基經(jīng)適當溫度下培養(yǎng)適當時間后用作工作用菌種（W3）。

5. 將第三代菌種（G3）冷凍或低溫保存，將生長、轉(zhuǎn)種后的G2菌種經(jīng)滅菌處理后丟棄。

6. 當工作用菌種代數(shù)小于5時，可直接用上一代工作用菌種轉(zhuǎn)接下一代工作用菌種，如W3可直接轉(zhuǎn)接為W4。

7. 按上述程序操作，直至G4轉(zhuǎn)為W5為止，需重新開啟安瓿，再重復上述操作程序、保藏和使用菌種。

以上方法中，菌種被分為兩類。傳代用菌種和工作用菌種，傳代用菌種用于甘油冷凍管法保藏，工作用菌種用斜面低溫保藏法保藏。

實驗證明，甘油冷凍管的有效期至少為2年，但其主要適用于細菌（需氧）、酵母菌的傳代、保藏、真菌和芽孢類細菌則需應用其它方法。

低溫生物菌種通用工藝包

生物的菌種產(chǎn)品在不同規(guī)模的小試和中試系統(tǒng)上進行過工藝開發(fā)與連續(xù)生產(chǎn)，已開發(fā)出在多種應用場景下利用吉態(tài)來生物微生物菌種進行生產(chǎn)的通用工藝包。使用過的原料包括：合成氨弛放氣、焦爐煤氣、生物質(zhì)氣化氣、鋼瓶氣和工業(yè)等。產(chǎn)出的產(chǎn)物包括：飼料蛋白原料（魚粉替代物）、生物油脂（脂肪酸）、生物柴油（脂肪酸甲酯）等大宗原料或產(chǎn)物，以及蛋白酶、DHA等高附加值產(chǎn)物。中試實現(xiàn)連續(xù)運行、穩(wěn)定生產(chǎn)。該通用工藝包采用模塊化設計，其中模塊A為吉態(tài)來生物的菌種產(chǎn)品，B/C/D為對應的發(fā)酵模塊、原料預處理模塊以及產(chǎn)物后處理模塊。工程企業(yè)可直接使用該工藝包進一步優(yōu)化，或在此基礎上為業(yè)主提供工程項目的定制解決方案

                                                       低溫生物菌種為什么能適應低溫環(huán)境？

微生物對溫度的要求不同與它們的膜結(jié)構(gòu)物理化學性質(zhì)有密切關系 根據(jù)細胞膜的液體鑲嵌模型，細胞在正常生理條件下，膜中的脂質(zhì)成分應保持液晶狀態(tài)，只有當細胞膜處于液晶狀態(tài)，才能維持細胞的正常生理功能，使細胞處于生長狀態(tài)微生物的生長溫度與細胞膜的液晶溫度范圍相一致。 
      1、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu) 

通過對嗜冷酶的蛋白質(zhì)模型和x一射線衍射分析表明，嗜冷酶分子間的作用力減弱，與溶劑的作用加強，酶結(jié)構(gòu)的柔韌性增加，使酶在低溫下容易被底物誘導產(chǎn)生催化作用。

2、蛋白質(zhì)合成 
嗜冷菌具有在0℃合成蛋白質(zhì)的能力。這是由于其核糖體、酶類以及細胞中的可溶性因子等對低溫的適應，蛋白質(zhì)翻譯的錯誤率相對低。許多中溫菌不能在O0C合成蛋白質(zhì)，一方面是由于其核糖體對低溫的不適應，翻譯過程中不能形成有效的起始復合物，另一方面是由于低溫下細胞膜的破壞導致氨基酸等內(nèi)容物的泄露。
       3、合成冷蛋白 

低溫微生物適應低溫的另一機制是合成冷休蛋白 將大腸菌從370C突然轉(zhuǎn)移到100C條件時細胞中會誘導合成一組冷休蛋白，它們對低溫的生理適應過程中發(fā)揮著重要作用，檢測嗜冷酵母的冷休反應，發(fā)現(xiàn)冷刺激后冷休蛋白在很短時間內(nèi)大量產(chǎn)生。 耐冷菌由于生活在溫度波動的環(huán)境中，它們必須忍受溫度的快速降低，這與它們產(chǎn)生的冷休蛋白是密切相關的。