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發(fā)布時(shí)間:2020-12-17 17:34  

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Tris通常被用于核酸DNA或RNA的瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液,通常用的緩沖體系有TAE、TBE、TPE等,即生物緩沖劑Tris配合EDTA以及醋酸、硼酸、磷酸等配制成的緩沖溶液。不同公司使用的緩沖液有所差異,相對(duì)來(lái)說(shuō)使用磷酸的TPE較少,主要是使用TAE和TBE緩沖液。在做核酸瓊脂糖凝膠電泳時(shí),首先的準(zhǔn)備工作就是制備凝膠,瓊脂糖凝膠做的好壞直接影響電泳效果和效率。這個(gè)制作過(guò)程耗時(shí)較長(zhǎng),節(jié)約時(shí)間考慮也可以直接購(gòu)買(mǎi)制備好的預(yù)制凝膠。






在實(shí)際工作中有些分析人員由于不大了解緩沖溶液的作用機(jī)理,當(dāng)所配制和使用的緩沖溶液與規(guī)定的數(shù)值不相符時(shí),為使緩沖溶液達(dá)到要求,就用鹽酸或等強(qiáng)酸、強(qiáng)堿進(jìn)行調(diào)節(jié), 以為這樣做可以使緩沖溶液盡快達(dá)到所需要的pH值,然而,結(jié)果卻適得其反,這樣的溶液pH值雖然調(diào)對(duì)了,可是它的緩沖體系卻被破壞了,作用也就失去了,緩沖溶液一般都是由弱酸及其弱酸鹽或是弱堿及其弱堿鹽組成的一對(duì)共軛體。






而生化實(shí)驗(yàn)室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、酸、Tris(三羥甲基氨基甲烷)等系統(tǒng),生化實(shí)驗(yàn)或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系,因?yàn)橛袝r(shí)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素并不是緩沖液的pH值,而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學(xué)反應(yīng)。硼酸鹽:硼酸鹽與許多化合物形成復(fù)鹽、如蔗糖。檸檬酸鹽:檸檬酸鹽離子容易與鈣結(jié)合,所以存在有鈣離子的情況下不能使用。




許多緩沖液中含有NaCl,以幫助保持蛋白的可溶性和模擬生理?xiàng)l件。一般常用150 mM的NaCl。

    在不同的蛋白純化步驟中,可能需要改變鹽離子的濃度。例如,如果是通過(guò)離子交換層析進(jìn)行蛋白純化,一開(kāi)始需要降低鹽離子的濃度(5~25mM)避免高離子強(qiáng)度和蛋白競(jìng)爭(zhēng)和填料結(jié)合,這樣可防止蛋白從離子交換柱中流穿,從而使柱子能夠結(jié)合目的蛋白,洗脫除去雜蛋白。